老哥俱乐部

细胞简介：

人胃癌成纤维分离自患有胃癌病人的胃癌组织；胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤
，在我国各种恶性肿瘤中发病率居位
，胃癌可发生于胃的任何部位，其中半数以上发生于胃窦部，胃大弯、胃小弯及前后壁均可受累，绝大多数胃癌属于腺癌。在胃癌侵袭和转移的过程中
，涉及诸多复杂的过程
，如细胞外基质的硬化和降解、新生血管的形成等，而这些过程会直接或间接的引起肿瘤微环境(Tumor mircoenvironment)的改变
。肿瘤微环境即肿瘤细胞生存的外部环境，由不同种类的非肿瘤性的细胞与细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)构成
，包括纤维细胞

，免疫细胞，内皮细胞，间充质干细胞等，肿瘤细胞通过调控这些间质细胞
，创造出有利于自身侵袭转移的条件，从而使得肿瘤得到进展

。越来越多的证据表明，肿瘤微环境的改变在肿瘤进展中扮演着重要的角色。在肿瘤微环境中
，研究多也是主要的间质细胞是肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)。CAFs 主要由肿瘤周边的正常成纤维细胞和成纤维细胞样细胞演化而来
。胃癌成纤维细胞多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构
，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。刚分离的胃癌成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中

。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形
，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团

；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密
，有的交叉重叠生长
，平坦、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大

，呈椭圆形，颜色淡

。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的人胃癌成纤维采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人胃癌成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基
：含FBS
、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气

，95%；CO2，5%

人胃癌成纤维体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶


，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

神经营养素 4(-4)   作用
：   ELISA   规格：   96T  

骨桥蛋白 ( Osteopoin)   作用：   ELISA   规格：   96T   德国 IBL

OX-40 ELISA Kit   作用

：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender

Human sP53 Kit   作用：   ELISA   规格：   96T   法国 Diaclone

豚鼠特异性免疫球蛋白E(sIgE)试剂盒 96T/48T

Human systemic lupus erythematosus (SLE) ELISA Kit 人系统性红斑狼疮(SLE)试剂盒

Humanansthyretin,TELISAKit 人转甲状腺素蛋白(T)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanc-sis试剂盒人c-sis试剂盒规格：96T/48T

组织EGFR激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

Humanprostacycline,PGIELISAKit人前列环素(PGI)试剂盒规格：96T/48T

IFNA5重组小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 (Fc 标签) Protein

角蛋白1(KRT1)重组蛋白 Recombinant Keratin 1 (KRT1)

BIN2重组人 BIN2 / BRAP-1 蛋白 Protein

IL12RB1 Protein Human 重组人 IL12RB1 / IL12RB / CD212 蛋白

HAVCR1 Protein Canine 重组狗 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

角蛋白1(KRT1)重组蛋白 Recombinant Keratin 1 (KRT1)

IL12RB1 Protein Human 重组人 IL12RB1 / IL12RB / CD212 蛋白

IFNA5重组小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 (Fc 标签) Protein

HAVCR1 Protein Canine 重组狗 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白

BIN2重组人 BIN2 / BRAP-1 蛋白 Protein

人胃癌成纤维细胞大鼠γ-基受体亚基α1(GABRA1)试剂盒 ，英文名
： GABRA1 ELISA Kit

Mice, superoxide dismase (SOD) ELISA Kit 小鼠超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒

ELISA 小鼠基质金属蛋白酶-2(mouse MMP-2)  进口分装

CLIAKitforIL-17ELISAKIT大鼠白介素17

通用型亮(leucine)含量比色法定量试剂盒20次

ELISAKitADAMTS13/vWF-cp大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。