老哥俱乐部

细胞简介
：

人肾小管上皮分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能
，生成肾素、促红细胞生成素、活性3
、前列腺素
、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官
。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定
，使新陈代谢得以正常进行
。肾小管是机体肾脏器官上与肾小囊壁层相连的一条细长上皮性小管，具有重吸收（reabsorption）和排泌作用
。肾小管按不同的形态结构、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和远端小管三部分；近端小管可分为直部和曲部，曲部也称为近曲小管，位于皮质迷路内，于肾小体附近高度蟠曲；远端小管曲部也称为远曲小管，位于皮质迷路内。肾小管上皮细胞是肾小管外面的一层细胞，肾小管上皮细胞的分离
、培养是研究肾脏疾病的一项重要技术，目前该分离方法有酶分离法、化学分离法筛网分离法、显微解剖分离法、流式细胞仪分离法等
。肾小管上皮细胞主要功能：①肾小管上皮细胞重吸收原尿中几乎全部的葡萄糖和氨基酸
；②排泌非营养物质进入终尿；③细胞能分泌炎症介质如细胞因子和趋化因子，通过产生IL-8或直接趋化白细胞参与急性炎症反应
；④移植肾炎症和新月体肾炎中PTEpiC表达IL-2R和MHC-Ⅱ类抗原，这说明肾小管上皮细胞参与肾免疫损伤的发生。随着对肾间质纤维化机制研究的日渐加深，肾小管上皮细胞（RTECs）在其中的作用日益被人们重视。因此，提供良好的肾小管上皮细胞模型

，在肾小管间质疾病的发病机制和治疗药物筛选的研究中是非常重要的。

方法简介
：

公司实验室分离的人肾小管上皮 采用胶原酶消化结合差速贴壁法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人肾小管上皮 经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相

：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小

；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次

，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

上腺髓质素(ADM)试剂盒   96T/48T

神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)试剂盒   96T/48T

热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)试剂盒   96T/48T

脑素/脑尿肽(BNP)试剂盒   96T/48T

豚鼠生长激素(GH)试剂盒 ，英文名： GH ELISA Kit

Human nerve growth factor (NGF) ELISA Kit 人的神经生长因子(NGF)试剂盒

MonkeyLaminin,LNELISAKit层连蛋白/板层素(LN)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBLAPELISAKit(Rabbit)兔骨碱性0酸酶试剂盒

细菌耐酸(ACID-FAST)染色试剂盒50次

rabbitmacrophageinflammatoryprotein5,MIP-5ELISAKit兔子巨噬细胞性蛋白5(MIP-5)试剂盒规格：96T/48T

HAVCR2重组人 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

心肌肌钙蛋白I(TNNI3)重组蛋白 Recombinant Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3)

NTM重组人 NTM / Neurotrimin 蛋白 Protein

IL13RA1 Protein Human 重组人 IL13RA1 蛋白

HA Protein H1N1 重组甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

心肌肌钙蛋白I(TNNI3)重组蛋白 Recombinant Troponin I Type 3, Cardiac (TNNI3)

IL13RA1 Protein Human 重组人 IL13RA1 蛋白

HAVCR2重组人 TIM-3 / HAVCR2 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

HA Protein H1N1 重组甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

NTM重组人 NTM / Neurotrimin 蛋白 Protein

人肾小管上皮细胞大鼠速激肽受体2(TACR2)试剂盒 ，英文名： TACR2 ELISA Kit

Mice of homocysteine (Hcy) ELISA Kit 小鼠同型半胱(Hcy)试剂盒

ratCoicosterone,COELISAKit 大鼠皮质酮/肾上腺酮(CO)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHIS(MouseHistamine)ELISAKit小鼠组胺

细胞ROCK激酶总活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitPⅢ大鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。