老哥俱乐部

细胞简介
：

人乳腺上皮分离自乳腺组织
；乳腺是复管泡状皮肤腺，主要由腺上皮细胞组成

，并具有特殊的泌乳功能
。在妊娠期，导管末梢发育成腺泡
；近年来的许多研究都表明乳腺癌
、乳腺炎等的发生都与乳腺上皮细胞（MEC）有密切联系
，体外分离培养MECs即成为研究开展的关键步骤
。乳腺是乳房的腺体组织，乳腺由导管和腺泡组成，腺泡是分泌乳汁的重要部分


。乳腺的正常发育是由体内激素和局部合成的生长因子共同调控
，其中乳腺表达的生长因子对乳腺上皮细胞的增殖、分化
、凋亡产生极大的影响。乳腺上皮分离自分娩后3-5天的乳腺组织
，为贴壁生长型细胞，呈多角形
、圆形以及短梭形

；乳腺上皮细胞主要功能即生乳功能
。

方法简介
：

公司实验室分离的人乳腺上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来

，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人乳腺上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体
、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS

、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一

、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养


；二、免疫荧光鉴定：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

兔子免疫球蛋白M(IgM)试剂盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白G(IgG)试剂盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白E(IgE)试剂盒   96T/48T

兔子免疫球蛋白A(IgA)试剂盒   96T/48T

小鼠白介素4(IL-4)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat heat shock protein 96 (HSP gp96) ELISA Kit 大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)试剂盒

Humaniegrin-linkedkinase1,ILK-1ELISAKit 人整合素连接激酶1(ILK-1)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCalreticulin,C试剂盒人钙网蛋白(C)试剂盒规格：96T/48T

重组逆转录病毒稳态表达细胞克隆冻存试剂盒50次

Humansolubleierleukin-1receptorⅡ，IL-1sRⅡELISAKit人白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)试剂盒规格：96T/48T

GFP重组水母 GFP 蛋白 Protein

TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 0.5mgTRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand) 坏死因子相关凋亡诱导配体/凋亡素2配体抗原

AMICA1重组人 JAML / AMICA 蛋白 Protein

GFER Protein Human 重组人 GFER / ALR 蛋白

IL32 Protein Human 重组人 Interleukin-32 / IL-32 蛋白 (isoform alpha, His 标签)

PLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase 0.5mgPLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase) 型纤溶酶原激活因子(多肽)

GFER Protein Human 重组人 GFER / ALR 蛋白

HA重组甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 Protein

FGF1 Protein Human 重组人 aFGF / FGF1 蛋白

CDK1重组人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 标签) Protein

人乳腺上皮细胞大鼠糖原0酸化酶B(PYGB)试剂盒 ，英文名： PYGB ELISA Kit

Mouse carbonic anhydrase (CA) ELISA Kit 小鼠酶(CA)试剂盒

RatAndrostenedione,ASDELISAKit 大鼠雄(ASD)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHNP1-3(Humanneuophilpeptide1-3)ELISAKit人中性粒细胞防御素1-3

细胞PKCζ激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitFlt3L大鼠FMS样酪激酶3配体

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系

。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。