老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织


，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min

，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人前列腺平滑肌分离自前列腺组织；前列腺（Prostate）是雄性的性腺器官
；前列腺是不成对的实质性器宫，由腺组织和肌组织构成
。前列腺如栗子
，底朝上
，与膀胱相贴
，尖朝下，抵泌尿生殖膈
，前面贴耻骨联合
，后面依直肠。前列腺腺体的中间有尿道穿过，扼守着尿道上口
，所以
，前列腺有问题时，排尿先受影响。前列腺是机体非常少有的
，具有内、外双重分泌功能的性分泌腺。作为外分泌腺
，前列腺每天分泌前列腺液，是构成精液主要成分
；作为内分泌腺，前列腺分泌的激素称为“前列腺素"。前列腺平滑肌细胞是前列腺的重要结构组成细胞之一
，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。前列腺平滑肌细胞原代分离培养3天后
，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一
，呈梭形、不规则形
、三角形或扇形
，核卵圆形

、居中；2周后细胞汇合

，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏
；细胞密度低时，常交织成网状
；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状
。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介：

公司实验室分离的人前列腺平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人前列腺平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1


、HBV、HCV、支原体

、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞

。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠原激活蛋白激酶14(MAPK14)检测试剂盒 ，英文名： MAPK14 ELISA Kit

Mouse advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)检测试剂盒

Ratadiponectin,ADPELISAKit 大鼠脂联素(ADP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHHCII(umanheparincofactorII)ELISAKit人肝素辅因子Ⅱ

细胞S6KINASE激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitCⅠCP大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽

GAG-P24重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype C, strain 92BR025) Protein

Thiosester-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原 0.5mgThiosester-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原)

IL7R重组人 IL7RA / CD127 蛋白 Protein

ICAM5 Protein Human 重组人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (Fc 标签)

HRG Protein Human 重组人 HPRG / HRG 蛋白

Thiosester-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原 0.5mgThiosester-containing protein 1 硫酯包含蛋白-1(抗原)

ICAM5 Protein Human 重组人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (Fc 标签)

GAG-P24重组人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 p24 蛋白 (group M, subtype C, strain 92BR025) Protein

HRG Protein Human 重组人 HPRG / HRG 蛋白

IL7R重组人 IL7RA / CD127 蛋白 Protein

小鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat cyclin D3 (Cyclin-D3) ELISA Kit 大鼠细胞周期素D3(Cyclin-D3)检测试剂盒

HumanNandrolonePhenylpropionate,NPELISAKit 人苯诺龙/苯去(NP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanconcanavalinA,ConA检测试剂盒人刀A(ConA)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织CDK5/P25激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

HumanProteinase3Aibody,PR3AbELISAKit人蛋白酶3抗体(PR3Ab)检测试剂盒规格：96T/48T

人前列腺平滑肌细胞兔白介素-18(rabbit IL-18)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

兔免疫球蛋白G(rabbit IgG)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔免疫球蛋白M(rabbit IgM)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

兔免疫球蛋白E(rabbit IgE)   作用：   ELISA   规格
：      进口分装