老哥俱乐部

细胞简介：

人脉络膜黑色素分离自眼球脉络膜组织
；脉络膜在视网膜和巩膜之间，含有丰富血管和色素细胞
，对外力冲击的耐受性较视网膜差，当眼球受到从前面来的外力的冲击作用通过玻璃体传到后极部时
，坚硬的巩膜在其外面又有抵抗作用，使脉络膜在内外两种作用夹攻下而发生破裂和出血
。脉络膜呈暗褐色，围绕视神经乳头部有照膜，为青绿色带金属光泽的三角形区
。脉络膜是眼球中膜的后2/3处的薄膜
，由纤维组织
、小血管和毛细血管组成，软而薄，棕红色
，在巩膜和视网膜之间
，续连于睫状体后方。脉络膜的血循环营养视网膜外层，其含有的丰富色素起遮光暗房作用。主要功能是营养视网膜外层及玻璃体，并有遮光作用
，使反射的物象清楚。同时对视觉系统起保护作用，对整个视觉神经有调节作用。续连于睫状体后方，含丰富的血管和色素细胞
，有营养和遮光作用
。

方法简介
：

公司实验室分离的人脉络膜黑色素细胞先用消化
、后-胶原酶混合消化结合专用培养基筛选法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的人脉络膜黑色素经Dopa染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次；

生长特性 贴壁

细胞形态 长梭形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清

，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

兔子白介素1(IL-1)ELISA 试剂盒

Human von Willebrand factor / ristocetin cofactor (VWF) ELISA Kit 人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)检测试剂盒

HumanBlockingaibody,BAELISAKit 人封闭抗体(BA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humaneyemuscleaibody,EMAb检测试剂盒人抗眼肌抗体(EMAb)检测试剂盒规格：96T/48T

组织TIE2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

humanoncostatinMreceptor,OSMRELISAKit人制瘤素M受体(OSMR)检测试剂盒规格
：96T/48T

TNFSF12重组食蟹猴 / 人 TNFSF12 蛋白 (Fc 标签) Protein

MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原 0.5mgMAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)

TPH1重组人 Tryptophan Hydroxylase 1 / TPH1 蛋白 Protein

IL1R2 Protein Human 重组人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

MERTK Protein Mouse 重组小鼠 MERTK / Mer 蛋白 (His & GST 标签)

MAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原 0.5mgMAPK-1/2 原活化蛋白激酶(抗原)

IL1R2 Protein Human 重组人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白

TNFSF12重组食蟹猴 / 人 TNFSF12 蛋白 (Fc 标签) Protein

MERTK Protein Mouse 重组小鼠 MERTK / Mer 蛋白 (His & GST 标签)

TPH1重组人 Tryptophan Hydroxylase 1 / TPH1 蛋白 Protein

豚鼠降钙素基因相关肽(CGRP)检测试剂盒 
，英文名

： CGRP ELISA Kit

Human factor related apoptosis (FAS/CD95) ELISA Kit 人凋亡相关因子(FAS/CD95)检测试剂盒

MonkeyMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit巨噬细胞移动抑制因子(MIF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforbFGF-9(Humanbasicfibroblastgrowthfactor9)ELISAKit人碱性成纤维细胞生长因子9

细菌同还原酶(aldo-ketoreductase)总活性比色法定量检测试剂20次

rabbitIerleukin6,IL-6ELISAKit兔子白介素6(IL-6)检测试剂盒规格：96T/48T

人脉络膜黑色素细胞溶酶体相关膜蛋白3   英文名称
：   Human Lysosomal Associated membrane protein 3   规格
：      英文缩写：   LAMP3

人乳酸脱氢酶   英文名称：   Human Lactate Dehydrogenase   规格：      英文缩写
：   LDH

人   英文名称：   lysozyme   规格：      英文缩写
：   LZM/LYS

甘露聚糖结合凝集素丝酸肽酶-2   英文名称：   mannan-binding lectin associated serine proteases   规格
：      英文缩写：   MASP-2

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。