老哥俱乐部

细胞简介：

人卵巢成纤维分离自卵巢组织
；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色
，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分
，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成
，其中有许多血管、淋巴管和神经。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分
，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大
，轮廓清楚

，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的卵巢成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足

，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形
，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长

，不聚集成团；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦

、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状

；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。卵巢成纤维细胞大多分布于卵巢表面，其主要特点和功能：①成纤维细胞在体外易于培养
；②卵巢损伤后，成纤维细胞能修复和重塑卵巢

；③能在卵巢炎症时有效控制炎症扩散。

方法简介

：

公司实验室分离的人卵巢成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人卵巢成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2，5%

实验报告

：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置

；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定

：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2

、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠前列腺素E合酶2(PTGES2)检测试剂盒 ，英文名： PTGES2 ELISA Kit

Mouse angiopoietin receptor Tie2 (ANG-R-Tie2) ELISA Kit 小鼠血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)检测试剂盒

Ratheatshockprotein20,hSP-20ELISAKit 大鼠热休克蛋白20(HSP-20)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGR-Beta(Humanglucocoicoidreceptor-Beta)ELISAKit人糖皮质激素受体β

细胞单胺氧化酶B型(MAO-B)活性比色法定量检测试剂盒20次

RatansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)检测试剂盒规格：96T/48T

REG1A重组食蟹猴 REG1A / PSPS 蛋白 Protein

lamin A 核纤层蛋白A抗原 0.5mglamin A 核纤层蛋白A抗原

SELL重组人 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein

HMGB1 Protein Human 重组人 HMGB1 / HMG1 蛋白

IgG2b Protein Mouse 重组小鼠 IgG2b-Fc 蛋白

白介素17(IL17)重组蛋白 Recombinant Interleukin 17 (IL17)

HMGB1 Protein Human 重组人 HMGB1 / HMG1 蛋白

BCL2L1重组小鼠 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (aa 1-212, His 标签) Protein

PROCR Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白 (Fc 标签)

GOT1重组人 GOT1 / Aspartate aminotransferase 蛋白 Protein

小鼠L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat dehydroepiandrosterone (DHEA) ELISA Kit 大鼠脱氢表雄酮(DHEA)检测试剂盒

HumanProgesterone,PROGELISAkit 人孕激素/孕酮(PROG)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCollageypeⅡ,ColⅡ检测试剂盒人Ⅱ型胶原(ColⅡ)检测试剂盒规格
：96T/48T

组织3-羟-3-甲戊二酰(HMG-COA)还原酶活性直接比色法定量检测试剂盒20次

HumaeceptorⅠfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅠELISAKitGFc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)检测试剂盒规格：96T/48T

人卵巢成纤维细胞兔粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔子α2抗纤溶酶(α2-AP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态

。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象

。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决


。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。