老哥俱乐部

细胞简介：

人筋膜成纤维分离自筋膜组织；筋膜
，解剖结构名
。指肌肉的坚韧部分。附于骨节者为筋
，包于肌腱外者为膜
。是联络关节
、肌肉
，主 司运动的组织。为肝所主，并赖肝血的滋养。筋膜是一类结缔组织，结缔组织除了筋膜还有其他表现的形式，如腱
、韧带
、腱膜和疤痕组织
。在不同的地方结缔组织也有着不同的名称：脑和脊髓周围的是脑膜；骨周围是骨膜
；心脏周围是心包；腹腔内表面的是腹膜；在皮下层包围整个身体和封闭肌肉和肌群的叫筋膜。筋膜位于肌肉的表面，分为浅筋膜和深筋膜两种。（1）浅筋膜位于皮下，又称皮下筋膜，由疏 松结缔组织构成
，其内含有脂肪、浅静脉、皮神经以及浅淋巴结和淋巴管等。脂肪的多少因身体部位
、性别和营养状况不同。临床常作的皮 下注射，即将药液注入浅筋膜内。（2）深筋膜 位于浅筋膜深面，又称固有筋膜，由致密结缔组织构成
，遍于全身且互相连续
。深筋膜包被 肌或肌群
、腺体、大血管和神经等形成筋膜鞘。四肢的深筋膜。伸入肌群之间与骨相连，分隔肌群，称肌间隔。成纤维细胞是结缔组织 的主要细胞成分，细胞呈梭形或扁的星状，具有突起。刚分离的成纤维细胞呈圆形
、折光性良好
，悬浮于培养基中
。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足

，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦
、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大
，呈椭圆形
，颜色淡

。细胞融合
，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

实验室分离的人筋膜成纤维采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人筋膜成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基
：基础培养基，含FBS
、bFGF、Insulin

、Penicillin、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态


：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液

：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

人筋膜成纤维体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告：

一
、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗

，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠蛋白激酶Cθ(PKCθ)检测试剂盒 ，英文名： PKCθ ELISA Kit

N terminal brain naiuretic peptide (-proBNP) ELISA Kit 人N端前脑素(-proBNP)检测试剂盒

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细胞色素P450亚酶CYP2E(AH)活性荧光定量检测试剂盒20次

Ratferritin,FEELISAKit大鼠铁蛋白(FE)检测试剂盒规格
：96T/48T

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小鼠糖皮质类固醇受体(GR)ELISA 试剂盒 96T/48T

The formation of red blood cells of rat prolactin receptor (EPOR) ELISA Kit 大鼠红细胞生成素受体(EPOR)检测试剂盒

Humaerminaldeoxynucleotidylansferase,TdTELISAKit 人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

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载玻片细胞TUBULIN蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

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小鼠羧甲基赖酸（CML）检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流

。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。