老哥俱乐部

细胞简介
：

人呼吸道上皮分离自呼吸道；呼吸道是肺呼吸时气流所经过的通道，有肺脊椎动物的呼吸道分上、下两部：鼻、咽和喉合称上呼吸道
。气管及其以后一分再分的管道，合称为下呼吸道，或称为气管树。气管树是随着动物的进化逐渐复杂化的
。整个呼吸道内表面都分布有分泌液和纤毛（鼻孔、咽后壁和声带黏膜除外）
，它能温暖（或冷却）、湿润和净化吸入的空气，对于呼吸器官和机体有着保护作用
。呼吸道以骨或软骨做支架，其内表面覆盖着黏膜
，黏膜内分布着丰富的毛细血管。呼吸道上皮细胞属于假复层纤毛柱状上皮，分布于呼吸道的内表面，主要由柱状，杯形，梭形和锥形等不同形状细胞组成
。看上去像复层上皮

，但实际上所有细胞底部均附于基膜上，属单层上皮
，故称假复层柱状上皮
，上皮表面有纤毛，杯状细胞可分泌粘液，包裹着大量细菌
，借助纤毛不断摆动将其慢慢移动至出消化道。

方法简介：

公司实验室分离的人呼吸道上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法


，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人呼吸道上皮经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min

，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

小鼠红细胞生成素受体(mouse EPOR)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(mouse ECP)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠上皮中性粒细胞活化肽-78(mouse ENA-78)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠血管内皮抑素(mouse Endostatin)   作用
：   ELISA   规格：      进口分装

小鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat ai alpha fodrin aibody IgG/IgA (-Fodrin IgG/IgA) ELISA Kit 大鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)试剂盒

Humanglycosylatedserumprotein,GSPELISAKit 人糖化蛋白(GSP)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAlpha-fetoprotein,AFP试剂盒人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)试剂盒规格
：96T/48T

植物半胱(cysteine)含量高效液相色谱法定量试剂盒20次

Monkeyβ2-microglobulin,BMG/β2-MGELISAKit猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)试剂盒规格：96T/48T

LEPR重组人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

糖原合酶激酶3α(GSK3α)重组蛋白 Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)

CNPY3重组人 CNPY3 / PRAT4A / ERDA5 蛋白 (Fc 标签) Protein

DLL4 Protein Human 重组人 DLL4 / Delta4 蛋白

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

糖原合酶激酶3α(GSK3α)重组蛋白 Recombinant Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha (GSK3a)

DLL4 Protein Human 重组人 DLL4 / Delta4 蛋白

LEPR重组人 Leptin Receptor / LEPR / CD295 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

HA Protein H5N1 重组甲型流感 H5N1 (A/Egypt/N05056/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

CNPY3重组人 CNPY3 / PRAT4A / ERDA5 蛋白 (Fc 标签) Protein

人呼吸道上皮细胞大鼠血管内皮生长因子C(VEGFC)试剂盒 ，英文名： VEGFC ELISA Kit

Mouse noradrenaline (NA) ELISA Kit 小鼠去甲(NA)试剂盒

Mousemonocytechemotacticprotein1/monocytechemotacticandactivatingfactor,MCP-1/MCAFELISAkit 小鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanbactericidal/permeabilityincreasingprotein,BPIELISAKit人杀菌性/通透性增加蛋白

细胞EPHA1激酶活性定量试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitPP大鼠蛋酸酶

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液

、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中

，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。