老哥俱乐部

细胞简介：

人关节韧带成纤维分离自关节韧带组织；韧带是纤维结缔组织，将各个骨头在关节处连接起来
，并在关节活动时加固关节稳定关节。其中颞下颌关节、踝关 节、膝关节韧带组织研究较多
，颞下颌关节两侧各有三条
，即颞下颌韧带
、茎突下颌韧带和蝶下颌韧带。踝关节周围韧带根据其解剖位置可以分成3组，外侧韧带 
，内侧三角韧带
，胫腓联合韧带
。膝关节的韧带有囊外韧带和囊内韧带,其共同作用为加强关节的稳定性。囊外韧带主要有:髌韧带位于髌骨的下部，关节囊的前 方,是股四头肌肌腱的延续,向下附着于胫骨粗隆，两侧有侧副韧帶加强
；囊内韧带:主要为交叉韧带:前交叉韧带附着于胫骨髁间隆起前份和股骨外侧髁的内侧面 ，防止胫骨过度前移;后交叉韧带附着于胫骨髁间隆起后份与股骨内侧髁的外侧面
，防止胫骨过度后移
。另外，在膝关节内尚有膝横韧带。任何关节韧带均可由于 外伤而发生损伤
，但影响较大又较常见的是膝关节韧带损伤和踝关节韧带损伤。膝关节韧带损伤

，常见者为膝关节侧副韧带损伤
。多因膝关节微屈时，突然受到 内翻或外翻的冲击力所致。踝关节韧带损伤
。多因行走或跑跳时误入不平之处所致

。以外侧损伤多见。韧带是致密纤维结缔组织
，主要特点是细胞、基质成分少
，纤维非常多、纤维粗大排列紧密，且排列方向与承受张力的方向一致，有很强的保护和支持作用。韧带主要包含韧带成纤维细胞。人关节韧带成纤维对研究关节韧带损伤有重要意义。

方法简介：

实验室分离的人关节韧带成纤维采用 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶
。

质量检测

实验室分离的人关节韧带成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：基础培养基，含FBS
、bFGF
、Insulin
、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率
：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2
，5%

人关节韧带成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1


、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

小鼠脱氢表雄酮酯(DHEA-S)ELISA 试剂盒

One Japanese encephalitis aibody IgG (JE IgG) ELISA Kit 人流行性乙型脑抗体IgG(JE IgG)检测试剂盒

HumanBcellreceptor,BCRELISAKit 人B细胞受体(BCR)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenNuclearfactor-kappaB,NF-κB检测试剂盒鸡核因子κB(NF-κB)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞P38蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

mousefollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit小鼠促卵泡素(FSH)检测试剂盒规格
：96T/48T

PRLR重组小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

BMP4(bone morphogenetic protein 4 0.5mgBMP4(bone morphogenetic protein 4) 骨形态发生蛋白4(抗原)

KIT重组人 KIT / c-KIT / CD117 蛋白 (aa 540-972, His & GST 标签) Protein

CFD Protein Human 重组人 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白

CSF2RB Protein Rat 重组大鼠 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 (Fc 标签)

BMP4(bone morphogenetic protein 4 0.5mgBMP4(bone morphogenetic protein 4) 骨形态发生蛋白4(抗原)

CFD Protein Human 重组人 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白

PRLR重组小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 蛋白 (His & Fc 标签) Protein

CSF2RB Protein Rat 重组大鼠 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 (Fc 标签)

KIT重组人 KIT / c-KIT / CD117 蛋白 (aa 540-972, His & GST 标签) Protein

小鼠褪黑素(MT/MLT)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human keratan sulfate (KS) ELISA Kit 人角质素(KS)检测试剂盒

Humannonmethylatedoligonucleotide,NONELISAKit 人非甲基化寡核苷酸(NON)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickensecretoryimmunoglobulinA,SIgA检测试剂盒鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞PARP蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseFibronectin,FNELISAKit小鼠纤连蛋白(FN)检测试剂盒规格

：96T/48T

人关节韧带成纤维细胞小鼠脱酶(ID)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠褪黑素(MT/MLT)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠透明质酸(HA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例

、所需细胞因子等

，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况

，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。