老哥俱乐部

细胞简介
：

人骨骼肌成纤维分离自四肢肌肉组织
；骨骼肌又称横纹肌

，肌肉中的一种
，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌
，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌
，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉可根据共形状

、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌
、菱形肌、三角肌、梨状肌等
。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹
，核很多，且都位于细胞膜下方

。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间
，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞，细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多
，且都位于细胞膜下方
，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。

方法简介：

实验室分离的人骨骼肌成纤维采用 - 胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人骨骼肌成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息
：

培养基
：含FBS、bFGF
、Insulin
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右
；3代以内状态佳

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气
，95%
；CO2
，5%

人骨骼肌成纤维体外培养周期有限

；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

实验报告
：

一
、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠白血病抑制因子(LIF)检测试剂盒 ，英文名： LIF ELISA Kit

Opioid receptor in mouse beta (beta -EPR) ELISA Kit 小鼠β内啡肽受体(β-EPR)检测试剂盒

ELISA 小鼠(mouse Fibrinogen)  进口分装

CLIAKitforIrna(HumanImmuneRNA)ELISAKit人免疫核糖核酸

通用型动物细胞周期(G1/S和G2/M期)同步(SYNCHRONY)处理试剂盒10次

ELISAKitTNF-β大鼠肿瘤坏死因子β

C2重组人 C2 / Complement Component 2 蛋白 (Fc 标签) Protein

抗增生抗体靶分子1(TAPA1)重组蛋白 Recombinant Target Of The Antiproliferative Antibody 1 (TAPA1)

NTF3重组人 NTF3 / Neurotrophin 3 蛋白 Protein

CEACAM5 Protein Human 重组人 CEACAM5 / CD66e 蛋白

HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

抗增生抗体靶分子1(TAPA1)重组蛋白 Recombinant Target Of The Antiproliferative Antibody 1 (TAPA1)

CEACAM5 Protein Human 重组人 CEACAM5 / CD66e 蛋白

C2重组人 C2 / Complement Component 2 蛋白 (Fc 标签) Protein

HA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

NTF3重组人 NTF3 / Neurotrophin 3 蛋白 Protein

小鼠晚期氧化蛋白产物(AOPP)检测试剂盒 96T/48T

Rat caspase 9 (Casp-9) ELISA Kit 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)检测试剂盒

HumanProteinSELISAKit 人蛋白S(ProteinS)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG检测试剂盒鸡N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞P21蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

Mousefreefattyacids,FFAELISAKit小鼠游离脂肪酸(FFA)检测试剂盒规格
：96T/48T

人骨骼肌成纤维细胞小鼠3(VD3)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠2(VD2)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠(VD)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠C(VC)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。