老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养
：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min

，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

人肝动脉内皮分离自肝动脉组织；在胚胎期，肝脏有3条动脉供血，分别来源于胃左动脉、腹腔动脉和肠系膜上动脉
，这3条动脉分别的不同部位。出生后，一般保留一条动脉
，大部分为起源于腹腔动脉的动脉，由其分出左、右肝动脉供应左
、右半肝
。偶尔也可见起源于胃左动脉的动脉或起源于肠系膜上动脉的动脉。但也有2条动脉并存的情况，如起源于腹腔动脉和起源于胃左动脉（25%）
，起源于腹腔动脉和起源于肠系腊上动脉（10%）
，而起源于胃左动脉和起源于肠系膜上动脉的2条动脉同时存在的情况比较少见。此外，还有5%像胚胎期一样，3条动脉同时存在

。这种起源于腹腔动脉以外的肝动脉称为迷走肝动脉，如果肝脏没有起源于腹腔动脉的动脉供血时
，此种异位起源的肝动脉称替代动脉
，如果在常见肝动脉类型外，还有一支这种异位起始的动脉的一部分血流
，这种肝动脉称副肝动脉
。肝动脉内皮细胞是衬于肝动脉内表面的单层扁平上皮，在炎症时高表达黏附分子，与血流中白细胞表面黏附分子相互作用

，从而介导白细胞穿越血管壁，亦属一类非专职抗原提呈细胞。它们吞噬异物、细菌
、坏死和衰老的组织，还参与集体免疫活动
，包括：①血管收缩及血管舒张，从而控制血压；②凝血（血栓形成及纤维蛋白溶解）

；③动脉硬化；④血管生成；⑤炎症及肿胀（浮肿）；⑥内皮细胞亦控制一些物质，如白血球进出血管

。

方法简介：

公司实验室分离的人肝动脉内皮采用混合酶消化法结合差速贴壁法
，并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的人肝动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象

。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代

。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

小鼠内毒素(ET)ELISA 试剂盒

P Nixonn Ron (Prednisolone) ELISA Kit 人龙(Prednisolone)检测试剂盒

Human26Sproteasome,26SPSMELISAKit 人26S蛋白酶体(26SPSM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanAbnormalprothrombin,APT检测试剂盒人异常原(APT)检测试剂盒规格
：96T/48T

正常女性人体肝组织微粒体组分(5毫克/毫升)500微升

Mouseaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin,ADH/VP/AVPELISAKit小鼠抗利尿激素/血管加压素/精加压素(ADH/VP/AVP)检测试剂盒规格：96T/48T

EGFR重组小鼠 EGFR / HER1 / ErbB1 蛋白 (Fc 标签) Protein

半乳糖凝集素9(GAL9)重组蛋白 Recombinant Galectin 9 (GAL9)

LYZL2重组人 Lysozyme 2 / LYZL2 蛋白 Protein

CDON Protein Human 重组人 CDON / CDO 蛋白

IL2RA Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL2RA 蛋白

Alpha-Synuclein 核突触蛋白(抗原 0.5mgAlpha-Synuclein 核突触蛋白(抗原)

CDON Protein Human 重组人 CDON / CDO 蛋白

LYPD3重组小鼠 C4.4A / LYPD3 蛋白 Protein

ENPEP Protein Rat 重组大鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 蛋白 (aa 41-945, His 标签)

NLK重组人 nemo-like kinase / NLK 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠B6(VB6)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 6 (BMP-6) ELISA Kit 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)检测试剂盒

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinbeta,C/EBPβELISAKit 人CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenLipopolysaccharides,LPS检测试剂盒鸡脂多糖/内毒素(LPS)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞MAPK蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit小鼠胃肠癌标志物CA199检测试剂盒规格：96T/48T

人肝动脉内皮细胞小鼠细胞凋亡因子 (mouse Fas)   作用：   ELISA   规格
：   96T   美国 R&D

小鼠细胞凋亡因子配体 (mouse Fas-Ligand)   作用：   ELISA   规格
：   96T   美国 R&D

mouse Flt3 Ligand   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠粒细胞集落刺激因子 (mouse G-CSF)   作用

：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D