老哥俱乐部

细胞简介：

人肺小动脉内皮分离自肺小动脉组织；肺动脉干是短而粗的动脉，自右心室的动脉圆锥起始，向左后上方斜升，先在升主动脉根部的前面，继而至其左侧，至主动脉弓的下方，约在第5胸椎高度，分为左、右肺动脉


。左肺动脉较短，横行向左，经左主支气管前方至左肺门
，分两支进入左肺的上
、下叶。右肺动脉较长，横行向右，经主动脉升部和上腔静脉的后方达右肺门，分3支进入右肺上
、中
、下叶。左、右肺动脉的各分支在肺实质内又反复分支，与支气管的分支伴行，后达肺泡壁，形成稠密的毛细血管网。肺动脉输送的是含二氧化碳较多的静脉血。在肺动脉干分叉处稍左侧与主动脉弓下缘之间有一结缔组织索，称动脉韧带。管径在0.3～1mm之间，为小动脉（small-artery），小动脉包括粗细不等的几级分支，也属肌性动脉
。较大的小动脉
，内膜有明显的内弹性膜，中膜有几层平滑肌
，外膜厚度与中膜相近，一般没有外弹性膜
。口径在1mm以下的动脉，管壁有完整的平滑肌层及少量的弹性纤维和胶质纤维。小动脉是决定周围循环阻力大小的主要因素，也是调节微循环灌注量的“总开关"。典型的小动脉，其管壁的厚度与管径相比约为1∶2。中膜的肌层相对比其他动脉为厚，当平滑肌在神经支配下强力收缩时，其管腔可以闭塞
，而使血液不能流入它所分布的毛细血管内，从而增加了周围血液循环的阻力。如果有许多小动脉同时收缩，可使血压显著上升
。反之
，当小动脉的平滑肌舒张时，则可使大量的血液流入毛细血管
，外周阻力明显下降
，血压降低
。终末小动脉(terminal arteri-ole)的口径为20～30μm；后小动脉(metar-teriole)
，又称毛细血管前小动脉(precapil-lary arteriole)的口径为12～15μm
。管壁内均有较稀疏的平滑肌，在毛细血管前小动脉分支的起始部分
，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛细血管前括约肌(precapillary sphinc-ter)
，其收缩或舒张，可调节真毛细血管的血流量，是调节微循环灌注量的“分开关"。支配小动脉平滑肌的交感神经纤维，可延伸到终末小动脉和后小动脉的平滑肌细胞
。在毛细血管前括约肌上交感神经纤维特别丰富。肺小动脉内皮细胞呈单层多角形铺路石状分布，该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。

方法简介
：

实验室分离的人肺小动脉内皮采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的人肺小动脉内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1

、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息

：

包被条件：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：含FBS、EGF

、bFGF、IGF
、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性

：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传2-3代

消化液
：0.25%

培养条件
：气相：空气，95%
；CO2，5%

人肺小动脉内皮体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态
。

实验报告
：

一
、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织

，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5

、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二

、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1

：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

大鼠c-Jun基末端激酶(JNK)检测试剂盒 ，英文名： JNK ELISA Kit

Mouse hepatocyte growth factor (HGF) ELISA Kit 小鼠肝细胞生长因子(HGF)检测试剂盒

MouseEpinephrine/Adrenaline,EPIELISAKit 小鼠(EPI)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanvimein,VIMELISAKit人波形蛋白

通用型细胞粘附性(celladhesion)比色法检测试剂盒50次

ELISAKitGHRP大鼠生长激素释放多肽

CD200R4重组小鼠 CD200R4 / CD200 Receptor 4 / CD200RLa 蛋白 Protein

CBX3/HP1 gamma 染色盒同源物3抗原 0.5mgCBX3/HP1 gamma 染色盒同源物3抗原

ACVR1重组人 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 Protein

FABP6 Protein Human 重组人 FABP6 / I-BABP 蛋白

TDGF1 Protein Rat 重组大鼠 Cripto / TDGF1 蛋白

CBX3/HP1 gamma 染色盒同源物3抗原 0.5mgCBX3/HP1 gamma 染色盒同源物3抗原

FABP6 Protein Human 重组人 FABP6 / I-BABP 蛋白

CD200R4重组小鼠 CD200R4 / CD200 Receptor 4 / CD200RLa 蛋白 Protein

TDGF1 Protein Rat 重组大鼠 Cripto / TDGF1 蛋白

ACVR1重组人 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 蛋白 Protein

小鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human kidney injury molecule 1 (Kim-1) ELISA Kit 人肾损伤分子1(Kim-1)检测试剂盒

humanHistamine,HISELISAKIT 人组胺(HIS)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-PL7-aibody检测试剂盒人PL7抗体/抗苏氨酰NA合成酶(PL7)检测试剂盒规格：96T/48T

植物细胞内氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒20次

Humaumorspecificansplaationaigen,TSTAELISAKit人特异性移植抗原(TSTA)检测试剂盒规格：96T/48T

人肺小动脉内皮细胞小鼠α2抗纤溶酶(α2-AP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠α1微球蛋白(α1-MG)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠T细胞活化连接蛋白(LAT)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。