老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min

；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

细胞简介：

鸡外周血单核分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中
，再在从血液中提取分离得到造血干细胞
，老哥俱乐部把这样得到的干细胞称为外周血干细胞
，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中提出外周血这一新概念
。单核细胞起源于骨髓中的造血干细胞
，并在骨髓中发育。当它们从骨髓进入血液时仍然是尚未成熟的细胞。与其他血细胞比较，单核细胞内含有更多的非特异性脂酶，并且具有更强的吞噬作用
。单核细胞在血液中停留2-3天后迁移到周围组织中，细胞体积继续增大，直径可达50-80μm

，细胞内所含的溶酶体颗粒和线粒体的数目也增多
，成为成熟的细胞。固定在组织中的单核细胞称为组织巨噬细胞
，它们经常大量存在于淋巴结
、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的单核细胞和组织巨噬细胞能生成并释放多种细胞毒、干扰素和白细胞介素
，参与机体防卫机制
，还产生一些能促进内皮细胞和平滑肌细胞生长的因子。在炎症周围单核细胞能进行细胞分裂，并包围异物。

方法简介
：

公司实验室分离的鸡外周血单核采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的鸡外周血单核经CD14免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 巨噬细胞样

传代特性 不增殖；不传代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化

，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清

。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿

。

公司正在出售的产品：

小鼠前列腺特异性抗原试剂盒   小鼠前列腺特异性抗原试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠前列腺特异性抗原试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠前列腺特异性抗原试剂盒
、小鼠前列腺特异性抗原试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠前列腺素试剂盒   小鼠前列腺素试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠前列腺素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源

：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠前列腺素试剂盒
、小鼠前列腺素试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽试剂盒   小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽试剂盒、小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

小鼠破骨细胞分化因子试剂盒   小鼠破骨细胞分化因子试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠破骨细胞分化因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名
：小鼠破骨细胞分化因子试剂盒
、小鼠破骨细胞分化因子试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠神经生长导向因子(Slit2) ELISA 试剂盒 96T/48T

Mueller tube inhibitory substance / ai Mueller tube hormone (MIS/AMH) ELISA Kit 人缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(MIS/AMH)试剂盒

HumanN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit 人N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯(AcSDKP)试剂盒 96T/48T 进口分装

GoatBeta-Endorphin,β-EP试剂盒山羊β内啡肽(β-EP)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母黑色素含量比色法定量试剂盒20次

MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit小鼠Ⅱ型胶原(ColⅡ)试剂盒规格：96T/48T

VNN1重组小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 Protein

氨酰tRNA合成酶复合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)重组蛋白 Recombinant Aminoacyl tRNA Synthetase Complex Interacting Multifunctional Protein 1 (AIMP1)

MAP1LC3A重组人 LC3A / MAP1LC3A 蛋白 Protein

COL2A1 Protein Human 重组人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 标签)

MS4A1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD20 / MS4A1 蛋白 (aa 213-297, His 标签)

氨酰tRNA合成酶复合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)重组蛋白 Recombinant Aminoacyl tRNA Synthetase Complex Interacting Multifunctional Protein 1 (AIMP1)

COL2A1 Protein Human 重组人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 标签)

VNN1重组小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 Protein

MS4A1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CD20 / MS4A1 蛋白 (aa 213-297, His 标签)

MAP1LC3A重组人 LC3A / MAP1LC3A 蛋白 Protein

鸡外周血单核细胞大鼠补体片断3a(C3a)试剂盒 ，英文名
： C3a ELISA Kit

Mouse Toll like receptor 9 (TLR-9/CD289) ELISA Kit 小鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)试剂盒

ELISA 小鼠表皮生长因子(mouse EGF)  进口分装

CLIAKitforLAM(HumanLipoarabinomannan)ELISAKit人脂阿拉伯甘露聚糖

通用型艾里塔拉军团菌(Legionellaerythra)试剂盒20次

ELISAKitVtg蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原