實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

雞外周血單核分離自外周血 ；外周血是除骨髓之外的血液 ，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血幹細胞釋放到血液中 ，再在從血液中提取分離得到造血幹細胞 ，老哥俱樂部把這樣得到的幹細胞稱為外周血幹細胞 ，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念 。單核細胞起源於骨髓中的造血幹細胞 ，並在骨髓中發育 。當它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細胞 。與其他血細胞比較 ，單核細胞內含有更多的非特異性脂酶 ，並且具有更強的吞噬作用 。單核細胞在血液中停留2-3天後遷移到周圍組織中 ，細胞體積繼續增大 ，直徑可達50-80μm ，細胞內所含的溶酶體顆粒和線粒體的數目也增多 ，成為成熟的細胞 。固定在組織中的單核細胞稱為組織巨噬細胞 ，它們經常大量存在於淋巴結 、肺泡壁 、骨髓 、肝和脾等器官 。激活了的單核細胞和組織巨噬細胞能生成並釋放多種細胞毒 、幹擾素和白細胞介素 ，參與機體防衛機製 ，還產生一些能促進內皮細胞和平滑肌細胞生長的因子 。在炎症周圍單核細胞能進行細胞分裂 ，並包圍異物 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的雞外周血單核采用密度梯度離心法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的雞外周血單核經CD14免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV、支原體 、細菌、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 巨噬細胞樣

傳代特性 不增殖 ；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

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小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒   小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝） ，產品別名 ：小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒 、小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠破骨細胞分化因子試劑盒   小鼠破骨細胞分化因子試劑盒   規格型號 ：96T/48T   小鼠破骨細胞分化因子試劑盒 ，規格型號 ：96T/48T ，來源 ：試劑盒（進口分裝），產品別名 ：小鼠破骨細胞分化因子試劑盒 、小鼠破骨細胞分化因子試劑盒   保存條件 ：2-8℃   保質期 ：6個月 。

小鼠神經生長導向因子(Slit2) ELISA 試劑盒 96T/48T

Mueller tube inhibitory substance / ai Mueller tube hormone (MIS/AMH) ELISA Kit 人繆勒管抑製物質/抗繆勒管激素(MIS/AMH)試劑盒

HumanN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit 人N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯(AcSDKP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

GoatBeta-Endorphin,β-EP試劑盒山羊β內啡肽(β-EP)試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母黑色素含量比色法定量試劑盒20次

MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit小鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)試劑盒規格 ：96T/48T

VNN1重組小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 Protein

氨酰tRNA合成酶複合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)重組蛋白 Recombinant Aminoacyl tRNA Synthetase Complex Interacting Multifunctional Protein 1 (AIMP1)

MAP1LC3A重組人 LC3A / MAP1LC3A 蛋白 Protein

COL2A1 Protein Human 重組人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 標簽)

MS4A1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD20 / MS4A1 蛋白 (aa 213-297, His 標簽)

氨酰tRNA合成酶複合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)重組蛋白 Recombinant Aminoacyl tRNA Synthetase Complex Interacting Multifunctional Protein 1 (AIMP1)

COL2A1 Protein Human 重組人 COL2A1 蛋白 (aa 1242-1487, His 標簽)

VNN1重組小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 Protein

MS4A1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD20 / MS4A1 蛋白 (aa 213-297, His 標簽)

MAP1LC3A重組人 LC3A / MAP1LC3A 蛋白 Protein

雞外周血單核細胞大鼠補體片斷3a(C3a)試劑盒  ，英文名 ： C3a ELISA Kit

Mouse Toll like receptor 9 (TLR-9/CD289) ELISA Kit 小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)試劑盒

ELISA 小鼠表皮生長因子(mouse EGF)  進口分裝

CLIAKitforLAM(HumanLipoarabinomannan)ELISAKit人脂阿拉伯甘露聚糖

通用型艾裏塔拉軍團菌(Legionellaerythra)試劑盒20次

ELISAKitVtg蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原