老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2

、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养

；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二
、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

鸡肺动脉成纤维分离自肺动脉组织；肺动脉亦称肺动脉干。在呼吸空气的脊椎动物中，把静脉血由心脏导向肺脏的动脉

。肺大动脉起于右心室
，在主动脉之前向左上后方斜行
，在主动脉弓下方分为左

、右肺动脉，经肺门入肺。肺动脉干位于心包内，为一粗短的动脉干。起自右心室
，在升主动脉前方向左后上方斜行，至主动脉弓下方分为左
、右肺动脉
。左肺动脉较短，在左主支气管前方横行，分二支进入左肺上

、下叶
。右肺动脉较长而粗
，经升主动脉和上腔静脉后方向右横行
，至右肺门处分为三支进入右肺上
、中、下叶。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大

，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形
，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛
，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性
、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺动脉成纤维细胞呈圆形
、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀
，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大
，细胞质透明，细胞核较大
，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布

。肺动脉成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持肺动脉的正常形态
；合成和释放细胞外基质；组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介
：

公司实验室分离的鸡肺动脉平滑肌采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来

，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的鸡肺动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%

；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h

。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1
：2传代 
。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠Ⅰ型前胶原C末端肽(CTX-Ⅰ)检测试剂盒 ，英文名： CTX-Ⅰ ELISA Kit

Mouse cyclic guanosine monophosphate (cGMP) ELISA Kit 小鼠环0酸鸟苷(cGMP)检测试剂盒

MouseB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISAKit 小鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumansolubleprotein185,sp185/HER-2ELISAKit人可溶性蛋白185

通用型乙酰酯酶活性荧光法定量检测试剂盒20次

ELISAKitODF大鼠破骨细胞分化因子

Spike中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 (aa 1-725, His 标签) Protein

TFAR19(TF-1 cell apoptsis-related gene 19 0.5mgTFAR19(TF-1 cell apoptsis-related gene 19) 凋亡相关蛋白TFAR19抗原

IL22RA2重组人 IL22BP / IL22RA2 蛋白 Protein

FNDC4 Protein Human 重组人 FNDC4 / FRCP1 蛋白 (ECD, Fc 标签)

ADAM15 Protein Human 重组人 ADAM15 / MDC15 蛋白

TFAR19(TF-1 cell apoptsis-related gene 19 0.5mgTFAR19(TF-1 cell apoptsis-related gene 19) 凋亡相关蛋白TFAR19抗原

FNDC4 Protein Human 重组人 FNDC4 / FRCP1 蛋白 (ECD, Fc 标签)

Spike中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 (aa 1-725, His 标签) Protein

ADAM15 Protein Human 重组人 ADAM15 / MDC15 蛋白

IL22RA2重组人 IL22BP / IL22RA2 蛋白 Protein

小鼠雌三醇(E3)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human glycated hemoglobin A1c (GHbA1c) ELISA Kit 人糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)检测试剂盒

HumanBradykinin,BKELISAKit 人血管舒缓(BK)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

humanBeta-Endorphin,β-EP检测试剂盒人β内啡肽(β-EP)检测试剂盒规格：96T/48T

植物种子叶绿体粗提分离试剂盒20次

Humaacrolimus-FK506ELISAKit人(FK506)检测试剂盒规格
：96T/48T

鸡肺动脉平滑肌细胞豚鼠表皮生长因子(EGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豚鼠白介素6(IL-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T