實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠棕色脂肪幹分離自棕色脂肪組織 ；動物體內存在棕色和白色兩種脂肪 ，白色脂肪堆積在皮下，負責儲存多餘熱量 ；棕色脂肪負責分解引發肥胖的白色脂肪 ，將後者轉化成二氧化碳 、水和熱量 ，本身不儲存熱量 。棕色脂肪組織呈棕色 ，其特點是組織中有豐富的毛細血管 ，脂肪細胞內散著許多小脂滴 ，線粒體大而豐富 ，核圓形 ，位於細胞中央 ，這種脂肪細胞也稱為多泡脂肪細胞 。棕色脂肪組織在成年動物極少 ，新生兒及冬眠動物較多 ，在新生兒主要分布在肩胛間區 、腋窩及頸後部等處 。棕色脂肪組織僅在嬰兒時期發揮作用 ，它們堆積在新生兒肩胛處 ，幫助維持體溫 。隨著年齡增長 ，棕色脂肪會逐漸消失 。終，動物體內隻殘存少量棕色脂肪細胞 ，分布於頸部和鎖骨 。脂肪幹細胞（ADSCs）是一種具有多向分化潛能的幹細胞 ，主要恢複組織細胞的修複功能 ，促進細胞的再生 ，恢複年輕麵容的同時 ，身體機能也得到充分改善 ，有效改善亞健康 、早衰等疾病 ，由內而外真正的有效抵抗衰老 。脂肪幹細胞具有很多優點 ：①具有自我更新及多向分化的潛能 ；②來源充足 ；③對供區的創傷較小 ；④獲得率及體外擴增速率高 。脂肪幹細胞是目前被廣泛應用於組織工程領域中理想的種子細胞 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠棕色脂肪幹采用膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠棕色脂肪幹經CD90免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右 ；3代以內狀態佳

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠C-肽(C-Peptide)檢測試劑盒  ，英文名 ： C-Peptide ELISA Kit

People two asymmeic dimethylarginine (ADMA) ELISA Kit 人不對稱二甲基精(ADMA)檢測試劑盒

DuckIerleukin2,IL-2ELISAkit 鴨白介素2(IL-2)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCA125卵巢癌相關抗原

細菌蛋白腖鐵瓊脂平板50個

Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

MSR1重組小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 蛋白 Protein

bFGF 堿性成纖維細胞生長因子(多肽抗原 0.5mgbFGF 堿性成纖維細胞生長因子(多肽抗原)

ALPI重組人 Alkaline Phosphatase / ALPI 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CDC42BPB Protein Human 重組人 CDC42BPB 蛋白 (His & GST 標簽)

CD226 Protein Rat 重組大鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (Fc 標簽)

bFGF 堿性成纖維細胞生長因子(多肽抗原 0.5mgbFGF 堿性成纖維細胞生長因子(多肽抗原)

CDC42BPB Protein Human 重組人 CDC42BPB 蛋白 (His & GST 標簽)

MSR1重組小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 蛋白 Protein

CD226 Protein Rat 重組大鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (Fc 標簽)

ALPI重組人 Alkaline Phosphatase / ALPI 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠細胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein receptor 1A (BMPR-1A) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)檢測試劑盒

Humayrosinehydroxylase,THELISAKit 人酪羥化酶(TH)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenHyaluronicacid,HA檢測試劑盒雞透明質酸(HA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

載玻片細胞COLLAGENII蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein40,Hsp-40ELISAKit小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠棕色脂肪幹細胞小鼠雄烯二(ASD)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠雄激素(androgen)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠性激素結合球蛋白(SHBG)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠信號轉導分子7(Smad7)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝