老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠子宫内膜基质分离自子宫组织；子宫是孕育胎儿的器官
，位于盆腔中部
，膀胱与直肠之间，其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈
、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持，这些结构受损或松弛时，可以引起子宫脱垂
。子宫内膜即黏膜，由上皮（属单层柱状上皮
，有分泌细胞和纤毛细胞二种）和固有膜（由结缔组织构成
，其内有大量的星形细胞
，称为基质细胞）组成
，子宫内膜可分为浅表的功能膜和深部的基底层
，功能层较厚，约占内膜厚度的4/5
；基底层较薄较致密，约占1/5，功能层可剥脱，而基底层不可剥脱。子宫内膜上皮细胞主要功能：①子宫内膜亦称子宫黏膜，是指构成哺乳类子宫内壁的一层

；②子宫内膜对动情素和孕激素都起反应，因此可随着性周期（发情周期

、月经周期）发生显著的变化。子宫内膜与胚胎附植密切相关
，在生殖生理的研究中占重要地位
。在胚胎与母体“对话"的过程中，子宫内膜上皮细胞充当了极其重要的角色。子宫内膜构成雌性哺乳动物子宫壁的内层，位于子宫腔面
，在动物生殖生理活动中占有重要地位
。子宫和子宫内膜是维持雌性动物生理功能和生育能力的重要器官，子宫内膜的再生修复是子宫的重要生理功能。体外培养的子宫内膜上皮细胞对于研究其生理功能
、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠子宫内膜基质采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠子宫内膜基质经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin

、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次

，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠白介素19(IL19)检测试剂盒 
，英文名： IL19 ELISA Kit

People with acridine orange (AO) ELISA Kit 人橙(AO)检测试剂盒

BovinesolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit 牛可溶性白细胞分化抗原86(B7-2/sCD86)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforCK(HumanCreatineKinase)ELISAKit人肌酸激酶

细胞脂质过氧化物(linoleicacid)细胞流式分析试剂盒10次

RatBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1AELISAKit大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)检测试剂盒规格：96T/48T

CD14重组小鼠 CD14 蛋白 Protein

CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule 0.5mgCD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule) 活化白细胞粘附分子抗原

CMA1重组人 CMA1 / Chymase 1 蛋白 Protein

CDC42 Protein Human 重组人 CDC42 / G25K 蛋白 (GST 标签)

CD274 Protein Rat 重组大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 标签)

CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule 0.5mgCD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule) 活化白细胞粘附分子抗原

CDC42 Protein Human 重组人 CDC42 / G25K 蛋白 (GST 标签)

CD14重组小鼠 CD14 蛋白 Protein

CD274 Protein Rat 重组大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (Fc 标签)

CMA1重组人 CMA1 / Chymase 1 蛋白 Protein

小鼠细小病毒(CPV)检测试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 7 (BMP-7) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)检测试剂盒

Humanmacrophagechemotaticfactor,MCFELISAKit 人巨噬细胞趋化因子(MCF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenHerpessimplexvirusⅡaibody,HSVⅡ-Ab检测试剂盒鸡单疱疹病毒Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CDK6蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

Mouseheatshockprotein60,hSP-60ELISAKit小鼠热休克蛋白60(Hsp-60)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠子宫内膜基质细胞小鼠溴脱氧核苷尿(BrdU)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠转化生长因子β2(TGFβ2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养


。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。