老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠滋养层干分离自胎盘组织；胎盘（placenta）是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官，由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。胎儿在子宫中发育
，依靠胎盘从母体取得营养，而双方保持相当的独立性。胎盘还产生多种维持妊娠的激素，是一个重要的内分泌器官

。有些爬行类和鱼类也以胎生方式繁殖后代
，胚胎生长出一些辅助结构如卵黄囊
、鳃丝等与母体组织紧密结合，以达到母子间物质的交换，这样的结构称假胎盘
。滋养层干细胞是胎盘组织细胞的祖细胞
，与胚胎着床和胎盘的形成密切相关。胚胎着床和胎盘形成是母体与胎儿建立联系的关键时期
，此时期滋养层细胞增殖速度快，滋养层干细胞自我更新和分化旺盛，与多种妊娠相关疾病的发生
、发展及其增殖
、功能调节的失常有密切关系。在哺乳动物胚胎发育过程中，胚胎细胞次分化形成内细胞团和滋养外胚层。滋养层干细胞是胎盘细胞的前体细胞
，在胎盘发育中有重要作用
。

方法简介

：

公司实验室分离的大鼠滋养层干采用囊胚组织贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠滋养层干经HLA-E（白细胞抗原）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV、支原体
、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液

，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

猪组织因子(TF)ELISA 试剂盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)检测试剂盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人载脂蛋白H

溴脱氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩尔)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit猪髓0脂碱性蛋白(MBP)检测试剂盒规格
：96T/48T

CCL2重组小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CDC37 Protein Human 重组人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 标签)

IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

1α(MEP1α)重组蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重组人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 标签)

CCL2重组小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重组人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠仙台病毒(Sendai)检测试剂盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)检测试剂盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体(PR3-ANCA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Chickenheparansulfate,HS检测试剂盒鸡类肝素(HS)检测试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞CDK4蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠热休克蛋白70(HSP-70)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠滋养层干细胞小鼠血管紧张素 I (mouse ANG I)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 Phoenix

小鼠血管紧张素 II (mouse ANG II)   作用：   ELISA   规格
：   96T   美国 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用：   ELISA   规格
：   96T   奥地利 Bender

大鼠 C 反应蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 ADI

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担

。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。