實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。

細胞簡介 ：

大鼠支氣管上皮分離自支氣管組織 ；支氣管（Bronchi） ，是指由氣管分出的各級分枝 ，由氣管分出的一級支氣管 ，即左 、右主支氣管 。左主支氣管與右主支氣管相比較 ，前者較細長 ，走向傾斜 ；後者較粗短 ，走向較前者略直 ，所以經氣管墮入的異物多進入右主支氣管 。支氣管和氣管還有以區別就是 ，氣管是以“C"型的氣管軟骨為支架 ，而支氣管不是 。支氣管上皮是氣道與外界環境接觸的道防線 ，不僅是各種病原體 、炎症介質作用的靶細胞 ，還作為效應細胞合成 、釋放多種炎性介質和細胞因子 ，從而參與氣道炎症及免疫反應 。支氣管上皮細胞在哮喘 、慢性阻塞性肺疾病 、肺癌 、肺囊性纖維化以及一些感染性呼吸道疾病的發病機製中均起著重要的作用 。體外培養的原代支氣管上皮細胞因與體內組織在形態結構和功能活動上存在很大的相似性 ，因此 ，在基礎及臨床研究中極為重要 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠支氣管上皮采用-混合消化法結合機械刮刷並通過上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠支氣管上皮經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠可溶性細胞間粘附分子-1   英文名稱 ：   Soluble Iercellular Adhesion Molecule-1   規格 ：      英文縮寫 ：   sICAM-1

小鼠幹擾素-α   英文名稱 ：   Ierferon α   規格 ：      英文縮寫 ：   IFN-α

小鼠幹擾素-β   英文名稱 ：   Ierferon β   規格 ：      英文縮寫 ：   IFN-β

小鼠幹擾素-γ   英文名稱 ：   Ierferon γ   規格 ：      英文縮寫 ：   IFN-γ

小鼠牛血清白蛋白(BSA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat methylase ELISA Kit (Methylase) 大鼠甲基化酶(Methylase)試劑盒

Humandynamin2,DNM2ELISAKit 人發動蛋白2(DNM2)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2試劑盒人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞線粒體分離(活性)試劑盒10次

MouseAquaporin4,AQP-4ELISAKit小鼠水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒

NTRK3重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 Protein

CD177/NB1 peptide 嗜中性粒細胞抗原CD177抗原 0.5mgCD177/NB1 peptide 嗜中性粒細胞抗原CD177抗原

AK1重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 Protein

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 蛋白

CD274 Protein Rat 重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白

CD177/NB1 peptide 嗜中性粒細胞抗原CD177抗原 0.5mgCD177/NB1 peptide 嗜中性粒細胞抗原CD177抗原

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大鼠支氣管上皮細胞大鼠脂聯素受體1(ADIPOR1)試劑盒  ，英文名 ： ADIPOR1 ELISA Kit

Mouse soluble endothelial protein C receptor (sEPCR) ELISA Kit 小鼠可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒

Mouseglucoprotein130,gp130ELISAKIT 小鼠糖蛋白130(gp130)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanhistoneH2A-H2B-DNAaoaibodyELISAKit人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體

B3高效液相色譜法定量試劑盒20次

ELISAKitCollagenaseI大鼠膠原酶I