老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠阴道上皮分离自阴道组织；阴道位于膀胱、尿道和直肠之间，是一个富有弹性的管状器官。它在人类生殖过程中具有多种生理功能，是连接子宫与外阴的通道
，是排出月经血、娩出婴儿的必经之路，也是一个重要的性交器官
。阴道壁按组织学由外到内分三层，即黏膜层、肌层和外膜，阴道黏膜是外层，也就是浅表的那一层，相当于皮肤的外面层一样。阴道上皮呈粉红色
，表面为复层鳞状上皮，但无角化层。在正常的月经周期中，阴道上皮脱落的上皮细胞的形态随着卵巢内分泌的变化而改变，因此通过阴道脱落上皮的病理检查便可以初步判断卵巢的内分泌功能状况。阴道粘膜是指阴道内壁分泌的保持阴道内壁表面湿润，保持表面活力的粘液膜层，因为其表面多粘稠，故为粘膜。在卵泡期，阴道粘膜受雌激素作用，上皮增厚
，表皮细胞角化；阴道上皮细胞内糖原丰富（注
：阴道粘膜上皮是复层扁平上皮又名“复层鳞状上皮"）

，在阴道杆菌作用下分解为乳酸
，保持阴道的酸性环境
；排卵后，受孕激素作用，阴道粘膜上皮大量脱落，角化现象消失。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠阴道上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠阴道上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定

，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相

：空气
，95%
；CO2，5%

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s

，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃

，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜

；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

大鼠蛋白激酶C(PKC)检测试剂盒 ，英文名： PKC ELISA Kit

Pig angiopoietin receptor Tie2 (ANG-R-Tie2) ELISA Kit 猪血管生成素受体Tie2(ANG-R-Tie2)检测试剂盒

病毒H7亚型核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 48T

CLIAKitforLp-PL-A2(Mouselipoprotein-associatedphospholipaseA2)ELISAKit小鼠脂蛋白相关0脂酶A2

通用石蜡切片HRP酶联检测封闭溶液10毫升

ELISAKitHSVⅡ-Ab鸡单疱疹病毒Ⅱ型抗体

BSG重组小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 蛋白 Protein

CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP 0.5mgCCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP) 瓜环肽

STAT6重组人 STAT6 蛋白 Protein

CD93 Protein Human 重组人 CD93 / C1QR1 蛋白 (Fc 标签)

CDH13 Protein Rat 重组大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 蛋白

CCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP 0.5mgCCP peptide (cyclic citrullinated peptide,CCP) 瓜环肽

CD93 Protein Human 重组人 CD93 / C1QR1 蛋白 (Fc 标签)

BSG重组小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 蛋白 Protein

CDH13 Protein Rat 重组大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 蛋白

STAT6重组人 STAT6 蛋白 Protein

小鼠纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human lymphotoxin alpha (LTA) ELISA Kit 人淋巴毒素α(LTA)检测试剂盒

Human6-hydroxydopamine,6-OHDAELISAKit 人6-羟多巴胺(6-OHDA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Chickenglialfibrillaryacidicprotein,GFAP检测试剂盒鸡神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)检测试剂盒规格
：96T/48T

载玻片细胞CASPASE-6蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次

Mousehepaticlipase,HLELISAKit小鼠肝脂酶(HL)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠阴道上皮细胞小鼠血管内皮生长因子受体 -1(mouse VEGF-R1)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

小鼠血管内皮生长因子受体 2(mouse VEGF-R2)   作用：   ELISA   规格：   96T   美国 R&D

大鼠Active Caspase-3   作用：   ELISA   规格：      进口分装

大鼠Active Caspase-7   作用：   ELISA   规格
：      进口分装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化
，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注

：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。