老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下

，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介

：

大鼠胚胎羊膜分离自羊膜组织；羊膜为单层上皮细胞互相连接构成的薄膜。单层上皮细胞具有分泌羊水的作用。随着胚胎的生长发育

，羊膜与绒毛密切紧贴
，形成胎膜。胎膜随着羊膜腔逐渐扩大而呈半透明的薄膜，无血管
，富有韧性（胎膜也就是羊膜腔的囊壁）。羊膜腔内充满的液体为羊水。羊膜仅覆盖在胎盘的儿体面
，并不深入胎盘组织中，随着妊娠的进展羊膜腔逐渐扩大

，占据整个子宫腔
，羊膜是胎膜内一层

，是一层半透明的薄膜，与覆盖在胎盘
、脐带的羊膜层相连接。羊膜是胎盘的内层
，与人眼结膜组织结构相似，含有眼表上皮细胞，包括结膜细胞和角膜上皮细胞生长所需要的物质，其光滑，无血管、神经及淋巴，具有一定的弹性，厚0.02~0.5mm
，在电镜下
，其分为五层

：上皮层、基底膜

、致密层、纤维母细胞层和海绵层，羊膜基底膜和羊膜基质层含有大量不同的胶元
，主要为i、iii、iv、v
、vii型胶原和纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等成份，正是这些成份使羊膜可以充当“移植的基底膜"而发挥一种新的健康合适的基质。羊膜细胞主要由羊膜上皮细胞和羊膜间充质细胞组成，均具有多分化潜能
，可转化为神经元，且还有合成
、释放生物活性物质和神经营养因子的功能。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠羊膜胚胎采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠羊膜胚胎经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV

、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2
，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好
，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书

，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题

，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系

，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1

：2传代


。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠激活调节趋化因子(TARC)检测试剂盒 ，英文名
： TARC ELISA Kit

Mouse heat shock protein 27 (HSP-27) ELISA Kit 小鼠热休克蛋白27(HSP-27)检测试剂盒

MouseC-ReactiveProtein,CRPELISAKit 小鼠C反应蛋白(CRP)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanai-thrombieceptor,AELISAKit人抗受体

细胞FAK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitBigET大鼠大内皮素

大鼠

Collagen I(Anti-Collagen Type I 0.5mgCollagen I(Anti-Collagen Type I) I型胶原蛋白

NRP1重组人 Neuropilin-1 / NRP1 / CD304 蛋白 Protein

FANCA Protein Human 重组人 FANCA / FACA 蛋白

IL13RA1 Protein Mouse 重组小鼠 IL13RA1 蛋白

Collagen I(Anti-Collagen Type I 0.5mgCollagen I(Anti-Collagen Type I) I型胶原蛋白

FANCA Protein Human 重组人 FANCA / FACA 蛋白

大鼠

IL13RA1 Protein Mouse 重组小鼠 IL13RA1 蛋白

NRP1重组人 Neuropilin-1 / NRP1 / CD304 蛋白 Protein

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human growth factor (HGH) ELISA Kit 人生长因子(HGH)检测试剂盒

HumanGlucagon,GCELISAKit 人胰高血糖素(GC)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-Sa-aibody检测试剂盒人抗Sa抗体(ai-Sa-Ab)检测试剂盒规格：96T/48T

植物细胞周期M期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒10次

humanyptophanyl-NAsyhetase,WARSELISAKit人色氨酰NA合成酶(WARS)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠羊膜胚胎细胞小鼠FMS样酪酸激酶检测试剂盒   小鼠FMS样酪酸激酶试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠FMS样酪酸激酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠FMS样酪酸激酶试剂盒、小鼠FMS样酪酸激酶eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月

。

小鼠FMS样酪酸激酶3配体检测试剂盒   小鼠FMS样酪酸激酶3配体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠FMS样酪酸激酶3配体试剂盒，规格型号
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：6个月。

小鼠N-乙酰基-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯酸检测试剂盒   小鼠N-乙酰基-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯酸试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠N-乙酰基-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯酸试剂盒，规格型号
：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名
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：2-8℃   保质期
：6个月
。

小鼠Slit2检测试剂盒   小鼠Slit2试剂盒   规格型号
：96T/48T   小鼠Slit2试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠Slit2试剂盒、小鼠Slit2eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。