老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠牙龈成纤维分离自牙龈组织；牙龈指紧贴于牙颈周围及邻近的牙槽骨上淡红色的结构，由复层扁平上皮及固有层组成。是口腔黏膜的一部分

，血管丰富，呈淡红色

，坚韧而有弹性
，因缺乏黏膜下层
，直接与骨膜紧密相连，故牙龈不能移动。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚

，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动
，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用
。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好

，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁
，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起
；6h后细胞基本贴壁
，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀
，散在生长，不聚集成团
；细胞生长迅速
，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长

，平坦

、胞体较大，细胞质透明
，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡
。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠牙龈成纤维采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠牙龈成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV
、支原体、细菌

、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右
；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%
；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清

，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶


，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照

。

公司正在出售的产品
：

大鼠纤维胶凝蛋白1(FCN1)检测试剂盒 ，英文名
： FCN1 ELISA Kit

Mouse heat shock factor 1 (HSF1) ELISA Kit 小鼠热休克因子1(HSF1)检测试剂盒

MousesolubleE-selectin,sE-selectinELISAKit 小鼠可溶性E选择素(sE-selectin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanadvancedoxidationproteinproducts,AOPPELISAKit人晚期氧化蛋白产物

细胞HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒定性检测试剂盒20次

ELISAKitC5a大鼠补体片断5a

SELPLG重组小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 蛋白 Protein

胶质细胞系来源神经营养因子受体α1(GFRα1)重组蛋白 Recombinant Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor Receptor Alpha 1 (GFRa1)

DBI重组人 DBI / ACBD1 蛋白 Protein

FAS Protein Human 重组人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白

TNF Protein Canine 重组狗 TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A 蛋白

胶质细胞系来源神经营养因子受体α1(GFRα1)重组蛋白 Recombinant Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor Receptor Alpha 1 (GFRa1)

FAS Protein Human 重组人 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白

SELPLG重组小鼠 PSGL-1 / CD162 / SELPLG 蛋白 Protein

TNF Protein Canine 重组狗 TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A 蛋白

DBI重组人 DBI / ACBD1 蛋白 Protein

小鼠骨保护素(OPG)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human orexin receptor (OXR) ELISA Kit 人食欲素受体(OXR)检测试剂盒

HumanPancreastatinELISAKit 人胰抑制素(Pancreastatin)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-scl70aibody,SCL70/topoⅠ检测试剂盒人抗硬皮病抗体70(SCL70/topoⅠ)检测试剂盒规格：96T/48T

植物细胞周期S期同步(SYNCHRONY)处理试剂盒10次

Humanypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit人原激活肽(TAP)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠牙龈成纤维细胞小鼠DNA甲基转移酶1(DNMT1)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠C型尿肽(CNP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠C肽(C-Peptide)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠C反应蛋白(CRP)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。