老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养

；二
、免疫荧光鉴定：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min

，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠嗅球分离自嗅球组织
；嗅球是脊椎动物前脑结构中参与嗅觉的部分，用于感知气味。嗅球分为二个不同的结构
：主嗅球及辅助嗅球
。在大脑额叶来自许多嗅细胞的神经纤维缠集在一起
，形成线球状的部分。在这里，纤维与多个次级神经元——僧帽细胞的树突相连接，进而由这里伸出神经纤维形成嗅囊，终止于额叶下方
。一般认为它在嗅味的辨别中具有重要的功能。对于大部份的脊椎动物而言，嗅球位在大脑的前面
，不过人的嗅球位于大脑的内部
。嗅球由筛骨的筛板固定且保护嗅球，哺乳动物的筛板会分隔嗅球和嗅上皮，而嗅神经会穿过筛板中的筛孔而连接到嗅球。嗅球分为二个不同的结构
：主嗅球及辅助嗅球。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠嗅球采用消化法结合神经元专用培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×105cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠嗅球经MAP-2免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2天半量换液1次

生长特性 贴壁

细胞形态 神经元细胞样

传代特性 不传代，不增值，存活1-2周

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠心型脂肪酸结合蛋白(FABP3)检测试剂盒 
，英文名
： FABP3 ELISA Kit

Pla vitamin A (VA) ELISA Kit 植物A(VA)检测试剂盒

Mouseplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISAKit 小鼠纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanai-Ku-aibodyELISAKit人抗Ku抗体

细胞FY激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

ELISAKitACTH大鼠促肾上腺皮质激素

IFNA1重组大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 Protein

GPR30(G Protein Coupled Receptor 30 0.5mgGPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋白偶联受体30抗原

SLC3A2重组人 SLC3A2 / CD98 蛋白 Protein

CD68 Protein Human 重组人 CD68 / Macrosialin / Gp110 蛋白 (aa 1-319, His 标签)

AGO2 Protein Mouse 重组小鼠 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 蛋白

GPR30(G Protein Coupled Receptor 30 0.5mgGPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋白偶联受体30抗原

CD68 Protein Human 重组人 CD68 / Macrosialin / Gp110 蛋白 (aa 1-319, His 标签)

IFNA1重组大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 Protein

AGO2 Protein Mouse 重组小鼠 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 蛋白

SLC3A2重组人 SLC3A2 / CD98 蛋白 Protein

小鼠雄激素(androgen)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 大鼠甘肽/甘素(GAL)检测试剂盒

Humanglucose-6-phosphateisomerase,GPIELISAKit 人葡萄糖60酸异构酶(GPI)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickenAcetoaceticacid,ACAC检测试剂盒鸡乙酰乙酸检测(ACAC)检测试剂盒规格
：96T/48T

杂交清洗液500毫升

MouseHyaluronicacid,HAELISAKit小鼠透明质酸(HA)检测试剂盒规格
：96T/48T

大鼠嗅球细胞小鼠血栓调节蛋白(TM)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血清总补体(CH50)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血清(NO)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

小鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)检测试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装