實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠嗅球分離自嗅球組織 ；嗅球是脊椎動物前腦結構中參與嗅覺的部分 ，用於感知氣味 。嗅球分為二個不同的結構 ：主嗅球及輔助嗅球 。在大腦額葉來自許多嗅細胞的神經纖維纏集在一起 ，形成線球狀的部分 。在這裏 ，纖維與多個次級神經元——僧帽細胞的樹突相連接 ，進而由這裏伸出神經纖維形成嗅囊 ，終止於額葉下方 。一般認為它在嗅味的辨別中具有重要的功能 。對於大部份的脊椎動物而言 ，嗅球位在大腦的前麵 ，不過人的嗅球位於大腦的內部 。嗅球由篩骨的篩板固定且保護嗅球 ，哺乳動物的篩板會分隔嗅球和嗅上皮 ，而嗅神經會穿過篩板中的篩孔而連接到嗅球 。嗅球分為二個不同的結構 ：主嗅球及輔助嗅球 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠嗅球采用消化法結合神經元專用培養基培養 、化學試劑抑製法篩選製備而來 ，細胞總量約為5×105cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠嗅球經MAP-2免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27 Supplement 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2天半量換液1次

生長特性 貼壁

細胞形態 神經元細胞樣

傳代特性 不傳代 ，不增值 ，存活1-2周

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠心型脂肪酸結合蛋白(FABP3)檢測試劑盒  ，英文名 ： FABP3 ELISA Kit

Pla vitamin A (VA) ELISA Kit 植物A(VA)檢測試劑盒

Mouseplasminogenactivatorinhibitor,PAIELISAKit 小鼠纖溶酶原激活物抑製因子(PAI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanai-Ku-aibodyELISAKit人抗Ku抗體

細胞FY激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitACTH大鼠促腎上腺皮質激素

IFNA1重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 Protein

GPR30(G Protein Coupled Receptor 30 0.5mgGPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋白偶聯受體30抗原

SLC3A2重組人 SLC3A2 / CD98 蛋白 Protein

CD68 Protein Human 重組人 CD68 / Macrosialin / Gp110 蛋白 (aa 1-319, His 標簽)

AGO2 Protein Mouse 重組小鼠 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 蛋白

GPR30(G Protein Coupled Receptor 30 0.5mgGPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋白偶聯受體30抗原

CD68 Protein Human 重組人 CD68 / Macrosialin / Gp110 蛋白 (aa 1-319, His 標簽)

IFNA1重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 Protein

AGO2 Protein Mouse 重組小鼠 AGO2 / Argonaute 2 / EIF2C2 蛋白

SLC3A2重組人 SLC3A2 / CD98 蛋白 Protein

小鼠雄激素(androgen)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat galanin / galanin (GAL) ELISA Kit 大鼠甘肽/甘素(GAL)檢測試劑盒

Humanglucose-6-phosphateisomerase,GPIELISAKit 人葡萄糖60酸異構酶(GPI)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenAcetoaceticacid,ACAC檢測試劑盒雞乙酰乙酸檢測(ACAC)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

雜交清洗液500毫升

MouseHyaluronicacid,HAELISAKit小鼠透明質酸(HA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠嗅球細胞小鼠血栓調節蛋白(TM)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血清總補體(CH50)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血清(NO)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠血清澱粉樣蛋白A(SAA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝