實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠外周血巨噬分離自外周血 ；外周血是除骨髓之外的血液 ，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血幹細胞釋放到血液中 ，再在從血液中提取分離得到造血幹細胞 ，老哥俱樂部把這樣得到的幹細胞稱為外周血幹細胞 ，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念 。巨噬細胞屬免疫細胞 ，有多種功能 ，是研究細胞吞噬 、細胞免疫和分子免疫學的重要對象 。巨噬細胞較易獲得 ，便於培養 ，並可進行純化 。巨噬細胞屬不繁殖細胞群 ，在條件適宜下可生活2-3周 ，多用做原代培養 ，難以長期生存 。巨噬細胞（Macrophages）是一種位於組織內的白血球，源自單核細胞 ，而單核細胞又來源於骨髓中的前體細胞 。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞 ，在脊椎動物體內參與非特異性防衛（先天性免疫）和特異性防衛（細胞免疫） 。它們的主要功能是以固定細胞或遊離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用（即吞噬以及消化） ，並激活淋巴球或其他免疫細胞 ，令其對病原體作出反應 。

方法簡介 ：

實驗室分離的大鼠外周血巨噬采用取外周血 、通過密度梯度離心法 、差速貼壁 、細胞因子誘導法製備而來，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的大鼠外周血巨噬經CD68免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、M-CSF 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：巨噬細胞樣

傳代特性 ：屬於終末分化細胞 ；屬於不增殖細胞群

消化液 ：（12mM）

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

大鼠外周血巨噬體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的佳培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ，，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)檢測試劑盒  ，英文名 ： BMP-7 ELISA Kit

Porcine collagen type III (Col III) ELISA Kit 豬Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)檢測試劑盒

1型脊髓灰質病毒(PV-1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMK(HumanMidkine)ELISAKit人中期因子

體液脊髓過氧化酶(MPO)活性高質敏感比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitLH犬促黃體生成激素

TNF重組食蟹猴 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein

HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha 0.5mgHSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha ) 熱休克蛋白90α抗體

MGAT5重組人 MGAT5 / GGNT5 蛋白 Protein

CD3E Protein Human 重組人 CD3e / CD3 epsilon 蛋白 (His & Fc 標簽)

FST Protein Mouse 重組小鼠 Follistatin / FST 蛋白

HSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha 0.5mgHSP-90 Alpha(Heat Shock Protein 90 Alpha ) 熱休克蛋白90α抗體

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MGAT5重組人 MGAT5 / GGNT5 蛋白 Protein

小鼠血管性血友病因子/瑞斯托黴素輔因子(vWF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Dipeptidyl peptidase IV in two rats (DPP IV) ELISA Kit 大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)檢測試劑盒

HumanImmuneRNA,IrnaELISAKit 人免疫核糖核酸(Irna)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

抗抗體IgM(間接法二步法)

硬組織固著液(Susa固著液)50毫升

MouseIerleukin1,IL-1ELISAKit小鼠白介素1(IL-1)檢測試劑盒規格：96T/48T

大鼠外周血巨噬細胞小鼠胰澱素(Amylin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠遊離狀腺原酸(Free-T3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠白三烯C4(LTC4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠(Cyt-C)ELISAKit   ELISA.   96T/48T