老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠输尿管上皮分离自输尿管组织；输尿管上接肾盂
，下连膀胱，是一对细长的管道，呈扁圆柱状
，位于腹膜后
，为一肌肉粘膜所组成管状结构，沿腰大肌内侧的前方垂直下降进入骨盆。输尿管有三个狭窄部：一个在肾盂与输尿管移行处（输尿管起始处）；一个在越过小骨盆入口处；后一个在进入膀胱壁的内部。这些狭窄是结石、及坏死组织容易停留的部位。输尿管——膀胱连接处有一种特殊结构，即瓦耳代尔鞘，它能有效地防止膀胱内尿液返流到输尿管
。临床上将输尿管分为上

、中
、下三段
，也可称为腹段、盆段、膀胱段
。其中，腹段自肾盂输尿管交界处，到跨越髂动脉处；盆段，自髂动脉到膀胱壁；膀胱段，自膀胱壁内斜行至膀胱粘膜
、输尿管开口。输尿管管壁分为4层，黏膜层、固有层
、肌层、外膜。黏膜层表面为移行上皮，约有4-5层细胞
；固有层由细密的结缔组织构成，内含胶原纤维和少量弹性纤维
；输尿管肌层主要由内纵和外环两层平滑肌组成；外膜为疏松结缔组织，营养血管由外膜进入输尿管。其中，输尿管上皮细胞主要分布于黏膜层。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠输尿管上皮采用先消化
、然后机械分离法使输尿管分层、后胶原酶消化
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠输尿管上皮经PCK免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂
、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养

；

5

、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基

，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品：

山羊促生长激素释放激素(GHRH)试剂盒   96T/48T

山羊雌三醇(E3)试剂盒   96T/48T

山羊雌二醇(E2)试剂盒   96T/48T

山羊检测(e)试剂盒   96T/48T

豚鼠内皮素1(ET-1)试剂盒 

，英文名
： ET-1 ELISA Kit

Human low density lipoprotein immune complexes (LDL-IC) ELISA Kit 人低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)试剂盒

MonkeyIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit白介素2受体(IL-2R)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBigET(HumanBigEndothelin)ELISAKit人大内皮素

细菌尿素酶(UREASE)活性定性染色试剂盒20次

rabbitLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit兔子白三烯B4(LTB4)试剂盒规格

：96T/48T

ENPP7重组小鼠 ENPP7 / NPP-7 蛋白 Protein

肌红蛋白(MYO)天然蛋白 Native Myoglobin (MYO)

CD27重组人 CD27 / TNFRSF7 蛋白 (Fc 标签) Protein

IL17F Protein Human 重组人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白

IL2 Protein Rat 重组大鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

肌红蛋白(MYO)天然蛋白 Native Myoglobin (MYO)

IL17F Protein Human 重组人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白

ENPP7重组小鼠 ENPP7 / NPP-7 蛋白 Protein

IL2 Protein Rat 重组大鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

CD27重组人 CD27 / TNFRSF7 蛋白 (Fc 标签) Protein

大鼠输尿管上皮细胞人游离蛋白S(FP-S)ELISA 试剂盒

Major histocompatibility complex class II (MHC II /HLA- II) ELISA Kit 人主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)试剂盒

Humanfetalsulfoslycoproteinaigen,FSAELISAKit 人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanIerferonα,IFN-α试剂盒人α干扰素(IFN-α)试剂盒规格：96T/48T

组织结构型神经元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量试剂盒20次

HumanKallikrein11,KLK11ELISAKit人11(KLK11)试剂盒规格
：96T/48T

注意事项

：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态

、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担


。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min

，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。