老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠食管平滑肌分离自食管组织
；食管可分为颈段
、胸段和腹段，脊椎动物食管的颈段位于气管背后和脊柱前端，胸段位于左
、右肺之间的纵膈内
，胸段通过膈孔与腹腔内腹相连，腹段很短与胃相连。哺乳动物的食管结构上由内向外分四层：黏膜层、黏膜下层、肌层和外膜。其中，肌层上1/3段为骨骼肌，下1/3为平滑肌
，中段为骨骼肌和平滑肌混合组成。其中，肌纤维的排列方式分为内环形和外纵形两层
。食管的蠕动是由食管平滑肌收缩严格控制，食管还有括约肌，位于环状软骨水平的，称为食管上括约肌；位于食管下端，一部分在膈上，穿过膈孔

，另一部分在膈下的高压带
，称为食管下括约肌。食管平滑肌细胞原代分离培养3天后
，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形
，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏
；细胞密度低时，常交织成网状
；密度高时
，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合
，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介
：

公司实验室分离的大鼠食管平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠食管平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2
，5%

实验报告：

一

、分离与培养：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃
，5％CO2 培养箱中培养

；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养
；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品：

人脂蛋白a试剂盒   人脂蛋白a试剂盒   规格型号：96T/48T   人脂蛋白a试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名：人脂蛋白a试剂盒
、人脂蛋白a 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月
。

人脂阿拉伯甘露聚糖试剂盒   人脂阿拉伯甘露聚糖试剂盒   规格型号
：96T/48T   人脂阿拉伯甘露聚糖试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：试剂盒（进口分装）
，产品别名：人脂阿拉伯甘露聚糖试剂盒
、人脂阿拉伯甘露聚糖试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月。

人正常T细胞表达和分泌因子试剂盒   人正常T细胞表达和分泌因子试剂盒   规格型号
：96T/48T   人正常T细胞表达和分泌因子试剂盒
，规格型号：96T/48T，来源
：试剂盒（进口分装）


，产品别名：人正常T细胞表达和分泌因子试剂盒、人正常T细胞表达和分泌因子试剂盒   保存条件

：2-8℃   保质期：6个月
。

人整合素连接激酶1试剂盒   人整合素连接激酶1试剂盒   规格型号：96T/48T   人整合素连接激酶1试剂盒，规格型号：96T/48T，来源

：试剂盒（进口分装）
，产品别名
：人整合素连接激酶1试剂盒
、人整合素连接激酶1 试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期

：6个月。

豚鼠白介素8(IL-8)试剂盒 ，英文名
： IL-8 ELISA Kit

Two adenosine monophosphate (ADP) ELISA Kit 人二0酸腺苷(ADP)试剂盒

rabbitSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit 兔子S100B蛋白(S-100B)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforBeta-EPRELISAKit大鼠β内啡肽受体

细菌血液琼脂平板50个

RabbitHeatShockProtein20,HSP-20ELISAKit兔热休克蛋白20(HSP-20)试剂盒规格：96T/48T

EPHA4重组食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

Melamine/BSA 三聚胺偶联牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶联牛血清白蛋白

FES重组人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 标签) Protein

ING4 Protein Human 重组人 ING4 蛋白

EPO Protein Mouse 重组小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

Melamine/BSA 三聚胺偶联牛血清白蛋白 1mgMelamine/BSA 三聚胺偶联牛血清白蛋白

ING4 Protein Human 重组人 ING4 蛋白

EPHA4重组食蟹猴 EphA4 蛋白 Protein

EPO Protein Mouse 重组小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白

FES重组人 FES Kinase / Feline sarcoma oncogene 蛋白 (His & GST 标签) Protein

大鼠食管平滑肌细胞人真胰岛素(TI)ELISA 试剂盒

Human tumor necrosis factor alpha conveing enzyme (TACE) ELISA Kit 人肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)试剂盒

Humanproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit 人抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanImmunoreactivegrowthhormone,irGH试剂盒人免疫反应性生长激素(irGH)试剂盒规格：96T/48T

组织基质金属蛋白酶(MMP-14)活性荧光定量试剂盒20次(10样本)

HumanleukocyteaigenA

，HLA-AELISAKit人类白细胞抗原A(HLA-A)试剂盒规格：96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后

，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞

，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。