老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s，置37℃消化10 min后
，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定
：

1
、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠肾实质分离自肾组织
；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖
、蛋白质、氨基酸、钠离子
、钾离子、等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性3
、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能
，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行
。肾脏移植是临床上治疗慢性肾功能衰竭的有效方法，然而这种方法受到供体肾短缺的限制。肾细胞移植可部分解决供体肾短缺的问题，是未来可以替代肾脏移植的方法。因此
，体外肾细胞的培养受到国内外有关专家的密切关注
。原代肾细胞作为一种常用的肾脏毒理学研究对象
，其分离方法主要有机械研磨分离法和酶消化法
，酶消化法因对细胞损伤小、分离效果好而优于机械研磨分离法；目前常用的酶消化法主要是消化法和胶原酶消化法。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肾实质采用胶原酶-混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肾实质经检测，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin


、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气
，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠胆囊收缩素八肽(CCK-8)检测试剂盒 ，英文名： CCK-8 ELISA Kit

Porcine fibrinogen (Fbg) ELISA Kit 猪血纤蛋白原(Fbg)检测试剂盒

ELISA 小鼠促肾上腺皮质激素(mouse ACTH)  进口分装

CLIAKitforLPL(Mouselipoproteinlipase)ELISAKit小鼠脂蛋白脂酶

通用腺病毒穿梭载体5微克

ELISAKitIC鸡传染性鼻抗体

Spike重组人 spike glycoprotein 蛋白 (aa 1-760, His 标签) Protein

TGF beta 2 Propeptide 转移生长因子–β2前体肽 0.5mgTGF beta 2 Propeptide 转移生长因子–β2前体肽

PLK1重组人 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein

CD300E Protein Human 重组人 CD300E / IREM-2 蛋白 (Fc 标签)

PECAM1 Protein Human 重组人 CD31 / PECAM1 蛋白

TGF beta 2 Propeptide 转移生长因子–β2前体肽 0.5mgTGF beta 2 Propeptide 转移生长因子–β2前体肽

CD300E Protein Human 重组人 CD300E / IREM-2 蛋白 (Fc 标签)

Spike重组人 spike glycoprotein 蛋白 (aa 1-760, His 标签) Protein

PECAM1 Protein Human 重组人 CD31 / PECAM1 蛋白

PLK1重组人 PLK1 / PLK-1 蛋白 Protein

小鼠血小板反应蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat muscarinic acetylcholine receptor (M-AChR) ELISA Kit 大鼠毒蕈碱型乙酰受体(M-AChR)检测试剂盒

Humanα-galactosidase,αGALELISAKit 人α半乳糖苷酶(αGAL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor(Mouseai-IgEreceptoraibody)ELISAKit小鼠抗IgE受体抗体

饮料总乳酸比色法定量检测试剂盒20次

MouseIerleukin4,IL-4ELISAKit小鼠白介素4(IL-4)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠肾实质细胞小鼠孕激素/孕(PROG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠降钙素(CT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠脱氢表雄酯(DHEA-S)ELISAKit   ELISA.   96T/48T