實驗報告 ：

一、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠腮腺分離自腮腺組織 ；腮腺是哺乳類動物口腔中位於下頜角處的最大唾液腺 ，位於外耳道的前下方 ，下頜後窩內及下頜支的深麵 。腮腺也是某些無尾目動物頸部有毒皮膚腺的聚集體 ；唾液腺有3對 ，腮腺 、舌下腺和頜下腺 ，其中最大的一對是腮腺 。腮腺細胞是高度分化的上皮源性細胞 ，是一種營養需要複雜 、在一般合成培養基中不易生長 ，體外培養比較困難 。目前 ，DMEM培養液被認為較適於腺細胞的培養 。加入一定量的血清更有利於細胞的生長 、增殖與分化 。另外 ，接種的細胞密度也是培養成功的關鍵因素之一 ，尤其是在腺細胞這種單層細胞培養時 ，接種的細胞總數量和生長基質表麵的細胞密度對整個細胞的生長均有影響。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠腮腺采用膠原酶-聯合消化後差速貼壁 ，結合上皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠腮腺經PCK免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠多巴胺D1受體(D1R)檢測試劑盒  ，英文名 ： D1R ELISA Kit

Porcine heat shock protein 70 (HSP-70) ELISA Kit 豬熱休克蛋白70(HSP-70)檢測試劑盒

蟹特定基因序列(Cytb)核酸檢測試劑盒 48T

CLIAKitforLTD4(HumanleukoieneD4)ELISAKit人白三烯D4

體液總巰基含量比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitGH雞生長因子

IL2重組大鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 Protein

HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene 0.5mgHCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨細胞病毒UL49抗原

IL17F重組人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白 Protein

CD27 Protein Human 重組人 CD27 / TNFRSF7 蛋白 (Fc 標簽)

ENPP7 Protein Mouse 重組小鼠 ENPP7 / NPP-7 蛋白

HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene 0.5mgHCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨細胞病毒UL49抗原

CD27 Protein Human 重組人 CD27 / TNFRSF7 蛋白 (Fc 標簽)

IL2重組大鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白 Protein

ENPP7 Protein Mouse 重組小鼠 ENPP7 / NPP-7 蛋白

IL17F重組人 IL-17F / Interleukin-17F 蛋白 Protein

小鼠氧還原蛋白過氧化物酶2(PRDX2)檢測試劑盒 96T/48T

Human soluble fibrin monomer complex (SFMC) ELISA Kit 人可溶性血纖蛋白單體複合物(SFMC)檢測試劑盒

Humanarachidonate5-lipoxygenase,ALOX-5ELISAKit 人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor15-LO/LOX(Human15-lipoxygenase)ELISAKit人15脂加氧酶

飲料離子(Na)濃度化學比色法定量檢測試劑盒20次

MouseLDL-ICELISAKit小鼠低密度脂蛋白免疫複合物(LDL-IC)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠腮腺細胞小鼠脂聯素(mouse Adiponectin)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠抗線粒體抗體(mouse AMA)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠抗核抗體(mouse ANA)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝

小鼠血管緊張素II(mouse ANG II)   作用 ：   ELISA   規格 ：      進口分裝