老哥俱乐部

实验报告：

一
、分离与培养：

1

、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s
，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠胚成纤维分离自胚胎

；成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来
。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性
，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下
，它可以实现跟纤维细胞的互相转化
；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中

。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰
，分布较均匀，散在生长
，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态
，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦

、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合
，并彼此连接成网状
；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布
。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子
，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的一些因子，而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境，故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用


。

方法简介：

实验室分离的大鼠胚成纤维采用消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠胚成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体
、细菌

、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基：含FBS、bFGF、Insulin
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液
：0.25%

培养条件：气相：空气

，95%；CO2，5%

大鼠胚成纤维体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的培养状态
。

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞

，再900 rpm-1000 rpm离心3 min
，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因

，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注
：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品
：

大鼠谷酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)检测试剂盒 ，英文名： GAD-Ab ELISA Kit

Porcine ierferon gamma (IFN- gamma) ELISA Kit 猪γ干扰素(IFN-γ)检测试剂盒

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitformIgD(HumanmembraneIgD)ELISAKit人表面膜免疫球蛋白D

体液赖(lysine)含量荧光定量检测试剂盒20次

ELISAKitPROG牛孕激素/孕同

CSF1重组小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

胱天蛋白酶5(CASP5)重组蛋白 Recombinant Caspase 5 (CASP5)

CD33重组人 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

CD180 Protein Human 重组人 CD180 / RP105 / LY64 蛋白

CD2 Protein Canine 重组狗 CD2 蛋白 (Fc 标签)

胱天蛋白酶5(CASP5)重组蛋白 Recombinant Caspase 5 (CASP5)

CD180 Protein Human 重组人 CD180 / RP105 / LY64 蛋白

CSF1重组小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

CD2 Protein Canine 重组狗 CD2 蛋白 (Fc 标签)

CD33重组人 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat monocyte chemotactic protein 3 (MCP-3/CCL7) ELISA Kit 大鼠单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)检测试剂盒

Humanansferfactor,TFELISAKit 人转移因子(TF)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor25(OH)D3/25HVD3(Human25-DihydroxyvitaminD3)ELISAKit人25羟基3

饮料果胶化学比色法定量检测试剂盒20次

MouseL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit小鼠L苯解氨酶(PAL)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠胚成纤维细胞心肌肌钙蛋白1   英文名称：   cardiac oponin 1   规格：      英文缩写
：   CTn1

Ⅰ型胶原C端肽   英文名称：   C-telopeptide of type Ⅰ collagen   规格

：      英文缩写
：   CTX-Ⅰ

   英文名称：   Cytochrome C   规格
：      英文缩写：   Cytochrome C

CXC趋化因子受体1   英文名称

：   CXC chemokine receptor 1   规格
：      英文缩写：   CXCR1