實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠胚成纖維分離自胚胎 ；成纖維細胞（Fibroblast）是疏鬆結締組織的主要細胞成分 ，由胚胎時期的間充質細胞分化而來 。成纖維細胞較大，輪廓清楚 ，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構 ，其細胞核呈規則的卵圓形 ，核仁大而明顯 。成纖維細胞功能活動旺盛 ，細胞質嗜弱堿性 ，具明顯的蛋白質合成和分泌活動 ，在一定條件下 ，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化 ；成纖維細胞對不同程度的細胞變性 、壞死和組織缺損的修複有著十分重要的作用 。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形 、折光性良好 ，懸浮於培養基中 。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足 ，表現為小的突起 ；6h後細胞基本貼壁 ，伸展成梭形 ，胞核清晰 ，分布較均勻 ，散在生長 ，不聚集成團 ；細胞生長迅速 ，5-7天即呈融合狀態 ，細胞排列緊密 ，有的交叉重疊生長 ，平坦 、胞體較大 ，細胞質透明 ，細胞核較大 ，呈橢圓形 ，顏色淡 。細胞融合 ，並彼此連接成網狀 ；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布 。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布 。該細胞常用作ES細胞培養常用的飼養層細胞 ，能產生抑製ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子 ，故能有效地促進ES細胞的增殖並維持其未分化特性和多潛能性 ，且分泌效果優於外源添加的一些因子 ，而且可以為ES細胞的培養提供類似於體內的微環境 ，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用 。

方法簡介 ：

實驗室分離的大鼠胚成纖維采用消化法結合差速貼壁法製備而來 ，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶 。

質量檢測

實驗室分離的大鼠胚成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 ：含FBS 、bFGF 、Insulin 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 ：每2-3天換液一次

生長特性 ：貼壁

細胞形態 ：成纖維細胞樣

傳代特性 ：可傳3代左右

消化液 ：0.25%

培養條件 ：氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

大鼠胚成纖維體外培養周期有限 ；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養 ，以此保證該細胞的培養狀態 。

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠穀酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)檢測試劑盒  ，英文名 ： GAD-Ab ELISA Kit

Porcine ierferon gamma (IFN- gamma) ELISA Kit 豬γ幹擾素(IFN-γ)檢測試劑盒

產腸毒素性大腸杆菌(ETEC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitformIgD(HumanmembraneIgD)ELISAKit人表麵膜免疫球蛋白D

體液賴(lysine)含量熒光定量檢測試劑盒20次

ELISAKitPROG牛孕激素/孕同

CSF1重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

胱天蛋白酶5(CASP5)重組蛋白 Recombinant Caspase 5 (CASP5)

CD33重組人 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

CD180 Protein Human 重組人 CD180 / RP105 / LY64 蛋白

CD2 Protein Canine 重組狗 CD2 蛋白 (Fc 標簽)

胱天蛋白酶5(CASP5)重組蛋白 Recombinant Caspase 5 (CASP5)

CD180 Protein Human 重組人 CD180 / RP105 / LY64 蛋白

CSF1重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

CD2 Protein Canine 重組狗 CD2 蛋白 (Fc 標簽)

CD33重組人 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein

小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白2(IGFBP-2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat monocyte chemotactic protein 3 (MCP-3/CCL7) ELISA Kit 大鼠單核細胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)檢測試劑盒

Humanansferfactor,TFELISAKit 人轉移因子(TF)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor25(OH)D3/25HVD3(Human25-DihydroxyvitaminD3)ELISAKit人25羥基3

飲料果膠化學比色法定量檢測試劑盒20次

MouseL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit小鼠L苯解氨酶(PAL)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠胚成纖維細胞心肌肌鈣蛋白1   英文名稱 ：   cardiac oponin 1   規格 ：      英文縮寫 ：   CTn1

Ⅰ型膠原C端肽   英文名稱 ：   C-telopeptide of type Ⅰ collagen   規格 ：      英文縮寫 ：   CTX-Ⅰ

   英文名稱 ：   Cytochrome C   規格 ：      英文縮寫 ：   Cytochrome C

CXC趨化因子受體1   英文名稱 ：   CXC chemokine receptor 1   規格 ：      英文縮寫 ：   CXCR1