實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠腦靜脈血管內皮分離自腦靜脈組織 ；與腦動脈相比 ，腦靜脈管壁較薄 。與身體其他部位的靜脈不同 ，腦靜脈管壁中沒有靜脈瓣 ，靜脈血的回流依賴高位的勢能 。腦靜脈血的回流路徑可以歸納為 ：大部腦靜脈血經腦深部靜脈和腦血竇流入頸內靜脈醫|學教育網搜集整理 ；小部腦靜脈血經眼部翼狀靜脈叢 ，進入靜脈導血管再到頭皮 ，最後流入椎管中的椎旁靜脈係統 。腦靜脈係統有大量交通枝靜脈叢 ，即使兩側頸內靜脈都被阻塞 ，大腦靜脈血仍可經椎靜脈和頸外靜脈係統完成其回流 。腦靜脈血管內皮細胞的主要功能是維持血管內外的動態平衡 ，合成和分泌細胞因子和介質參與免疫反應 ，維持凝血和纖溶的動態平衡 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠腦靜脈血管內皮采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法 、並通過內皮細胞專用培養基培養篩選製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠腦靜脈血管內皮經CD31免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml） ，明膠（0.1%）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠基質金屬蛋白酶16(MMP16)檢測試劑盒  ，英文名 ： MMP16 ELISA Kit

Mouse histone H2b (histon-H2b) ELISA Kit 小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)檢測試劑盒

Ratypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit 大鼠原激活肽(TAP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforF1+2(Humanprothrombinfragme1+2)ELISAkit人原片段F1+2

細胞結構型內皮細胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Ratmyelinbasicprotein,MBPELISAKit大鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

VTCN1重組小鼠 B7-H4 / B7S1 / B7x 蛋白 (Fc 標簽) Protein

白介素8受體α(IL8Rα)重組蛋白 Recombinant Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra)

IL1R2重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 Protein

FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白

PDCD1LG2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白

白介素8受體α(IL8Rα)重組蛋白 Recombinant Interleukin 8 Receptor Alpha (IL8Ra)

FABP2 Protein Human 重組人 FABP2 / I-FABP 蛋白

VTCN1重組小鼠 B7-H4 / B7S1 / B7x 蛋白 (Fc 標簽) Protein

PDCD1LG2 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 B7-DC / PD-L2 / CD273 蛋白

IL1R2重組人 IL1R2 / IL1RB / CD121b 蛋白 Protein

小鼠漢坦病毒(HV)檢測試劑盒 96T/48T

Adrenaline (EPI) ELISA Kit 人(EPI)檢測試劑盒

humanEndothelin1,ET-1ELISAKit 人內皮素1(ET-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-parainfluenzavirusIgMaibody,ai-PIVIgM檢測試劑盒人抗副流感病毒IgM抗體(ai-PIVIgM)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

植物細胞壁鈣熒光白(Calcofluorwhite;CFW)熒光染色試劑盒20次

Humayrosinekinasewithimmunoglobulin-likeandEGF-likedomains2,Tie-2ELISAKit人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激酶2(Tie-2)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠腦靜脈血管內皮細胞小鼠α羥基脫氫酶(αHBDH)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠αS轉移酶(α-GST)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠α甘露糖苷酶(αManase)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝