實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠毛囊分離自皮膚毛囊組織 ；毛囊是表皮細胞連續形成的袋樣上皮 。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭 ，中心是一根毛發 ，立毛肌的一側斜附在毛囊壁上 ，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸 ，毛囊在皮膚表麵的開口是毛囊孔 。毛囊位於真皮和皮下組織中 ，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度 ，它是由包繞毛發與表皮相連的上皮鞘 ，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結構比較複雜的器官附件組織 。毛囊實際上是由結締組織和上皮兩部分所組成 ，除了具有結締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外 ，毛囊其餘部分都是由表皮細胞分化而來 。毛囊開口起始於皮膚表麵 ，而每個毛囊又和一個或多個腺胞相連 。每個腺胞解離成富含脂質的物質 ，卻又通過一個共同和毛囊相通連的皮脂腺導管將分泌物運送到皮膚表麵排出 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠毛囊采用-膠原酶聯合消化法製備而來製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠毛囊經Cytokeratin-19免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形 、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠幹細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)檢測試劑盒  ，英文名 ： SCF/MGF ELISA Kit

Porcine ierleukin 2 (IL-2) ELISA Kit 豬白介素2(IL-2)檢測試劑盒

肉毒杆菌(E/F型)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMethylaseELISAKit大鼠甲基化酶

體液牛病毒性腹瀉病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定量PCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitHpt/HP牛結合珠蛋白/觸珠蛋白

IL20重組大鼠 IL20 / Interleukin-20 蛋白 Protein

DRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原 0.5mgDRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原

PPM1G重組人 PPM1G / PP2C-gamma 蛋白 (aa 317-546, His 標簽) Protein

CD14 Protein Human 重組人 CD14 蛋白

OMD Protein Mouse 重組小鼠 Osteomodulin / OMD 蛋白

DRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原 0.5mgDRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原

CD14 Protein Human 重組人 CD14 蛋白

IL20重組大鼠 IL20 / Interleukin-20 蛋白 Protein

OMD Protein Mouse 重組小鼠 Osteomodulin / OMD 蛋白

PPM1G重組人 PPM1G / PP2C-gamma 蛋白 (aa 317-546, His 標簽) Protein

小鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)檢測試劑盒

Humanasymmeicaldimethylarginine,ADMAELISAKit 人不對稱二甲基精(ADMA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor5-HTELISAKit大鼠5羥色胺

飲料變質細菌(脂環酸芽孢杆菌屬Alicyclobacillus)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20次

MouseLysozyme,LZMELISAKit小鼠(LZM)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠毛囊細胞型脂肪酸結合蛋白   英文名稱 ：   Human hea Fatty Acid Binding Protein   規格 ：      英文縮寫 ：   hFABP

幽門螺旋杆菌免疫球蛋白Y   英文名稱：   Human Helicobacter pylori IgY   規格 ：      英文縮寫 ：   HP-IgY

甲型肝病毒抗體IgG   英文名稱 ：   Human Hepatitis A Virus IgG   規格 ：      英文縮寫 ：   HAV IgG

乙型肝病毒e抗原   英文名稱 ：   Human Hepatitis B e Aigen   規格 ：      英文縮寫 ：   HBeAg