老哥俱乐部

实验报告
：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液
，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置

，重复此步骤2-3次

，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜
；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介：

大鼠毛囊分离自皮肤毛囊组织；毛囊是表皮细胞连续形成的袋样上皮。其基底是真皮凹进的真皮毛乳头，中心是一根毛发
，立毛肌的一侧斜附在毛囊壁上，附着点的上方为皮脂腺通入毛囊的短颈
，毛囊在皮肤表面的开口是毛囊孔
。毛囊位于真皮和皮下组织中
，毛囊向下伸入真皮约有一厘米深度，它是由包绕毛发与表皮相连的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所组成的一个结构比较复杂的器官附件组织
。毛囊实际上是由结缔组织和上皮两部分所组成，除了具有结缔组织和血管的真皮乳头（毛乳头）外
，毛囊其余部分都是由表皮细胞分化而来
。毛囊开口起始于皮肤表面，而每个毛囊又和一个或多个腺胞相连。每个腺胞解离成富含脂质的物质
，却又通过一个共同和毛囊相通连的皮脂腺导管将分泌物运送到皮肤表面排出。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠毛囊采用-胶原酶联合消化法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠毛囊经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1、HBV、HCV
、支原体、细菌
、酵母和真菌等。

培养信息
：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS
、生长添加剂、Penicillin
、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%
；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基
、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用
。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 
。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)检测试剂盒 ，英文名： SCF/MGF ELISA Kit

Porcine ierleukin 2 (IL-2) ELISA Kit 猪白介素2(IL-2)检测试剂盒

肉毒杆菌(E/F型)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMethylaseELISAKit大鼠甲基化酶

体液牛病毒性腹泻病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定量PCR扩增检测试剂盒20次

ELISAKitHpt/HP牛结合珠蛋白/触珠蛋白

IL20重组大鼠 IL20 / Interleukin-20 蛋白 Protein

DRD4 receptor peptide 多巴胺受体-D4抗原 0.5mgDRD4 receptor peptide 多巴胺受体-D4抗原

PPM1G重组人 PPM1G / PP2C-gamma 蛋白 (aa 317-546, His 标签) Protein

CD14 Protein Human 重组人 CD14 蛋白

OMD Protein Mouse 重组小鼠 Osteomodulin / OMD 蛋白

DRD4 receptor peptide 多巴胺受体-D4抗原 0.5mgDRD4 receptor peptide 多巴胺受体-D4抗原

CD14 Protein Human 重组人 CD14 蛋白

IL20重组大鼠 IL20 / Interleukin-20 蛋白 Protein

OMD Protein Mouse 重组小鼠 Osteomodulin / OMD 蛋白

PPM1G重组人 PPM1G / PP2C-gamma 蛋白 (aa 317-546, His 标签) Protein

小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 人可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)检测试剂盒

Humanasymmeicaldimethylarginine,ADMAELISAKit 人不对称二甲基精(ADMA)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor5-HTELISAKit大鼠5羟色胺

饮料变质细菌(脂环酸芽孢杆菌属Alicyclobacillus)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20次

MouseLysozyme,LZMELISAKit小鼠(LZM)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠毛囊细胞型脂肪酸结合蛋白   英文名称：   Human hea Fatty Acid Binding Protein   规格：      英文缩写：   hFABP

幽门螺旋杆菌免疫球蛋白Y   英文名称

：   Human Helicobacter pylori IgY   规格：      英文缩写：   HP-IgY

甲型肝病毒抗体IgG   英文名称：   Human Hepatitis A Virus IgG   规格：      英文缩写
：   HAV IgG

乙型肝病毒e抗原   英文名称
：   Human Hepatitis B e Aigen   规格：      英文缩写：   HBeAg