老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠卵巢微血管内皮分离自卵巢组织
；卵巢是雌性动物的生殖器官
，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育（右侧已退化），呈葡萄状
，均为处于不同发育时期的卵泡
，卵泡呈黄色

，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关
。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构
，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分
，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经
。微血管又称毛细血管
。分布于各种组织和细胞间的最微细的血管。介于微动脉和微静脉之间。平均直径7-9微米，数量极多，成网状分布。管壁由一层内皮细胞及一薄层基膜组成
，厚约0.5微米
。基膜外面有薄层结缔组织，其中有纤维细胞、巨噬细胞和周细胞等。最细的微血管由一个内皮细胞围成管腔，较粗的微血管由2-3个内皮细胞围成
。分布于肌肉组织、神经组织和结缔组织中的微血管
，内皮细胞间为缝隙连接（缝隙宽150埃）
，称连续微血管
。血管内皮细胞在器官和组织的结构和功能上起着非常重要的作用。并与多种疾病的发生与发展有关
。近年来血管内皮细胞在炎症
、休克等一系列病理生理改变中的重要性愈来愈受到人们的重视。研究发现
，不同来源的内皮细胞在生物学特征
、结构和功能等方面均存在一定差别，而同是微血管内皮细胞，它们又存在器官和组织的特异性。

方法简介：

实验室分离的大鼠卵巢微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法
、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠卵巢微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV

、HCV、支原体、细菌
、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件
：PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基：含FBS
、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性

：可传2-3代

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气
，95%；CO2，5%

大鼠卵巢微血管内皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养
，以此保证该细胞的培养状态
。

实验报告：

一、分离与培养

：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液
，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养


；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基
，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时
，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后在室温条件下

，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照
。

公司正在出售的产品
：

大鼠肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)检测试剂盒 ，英文名： SP-D ELISA Kit

Porcine keratinocyte growth factor (KGF) ELISA Kit 猪角化细胞生长因子(KGF)检测试剂盒

转基因植物cry1A基因核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforMA/Melan-A(HumanMelanomaMarkerA)ELISAKit人黑色素瘤标记物

体液氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒50次

ELISAKitPP裸鼠蛋酸酶

CHODL重组小鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 Protein

Smad同源物7(Smad7)重组蛋白 Recombinant Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7 (Smad7)

CNPY2重组人 CNPY2 蛋白 Protein

CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)

NOV Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV 蛋白

Bcl2样蛋白11(BCL2L11)重组蛋白 Recombinant Bcl2 Like Protein 11 (BCL2L11)

CCL8 Protein Human 重组人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 标签)

HPGD重组小鼠 HPGD / 15-PGDH 蛋白 Protein

IL6ST Protein Rat 重组大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白

TMED1重组人 TMED1 蛋白 (Fc 标签) Protein

小鼠乙型肝e抗体(HBeAb)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human soluble cluster of differeiation 38 (sCD38) ELISA Kit 人可溶性白细胞分化抗原38(sCD38)检测试剂盒

HumanHelicobacterpyloriIgM,Hp-IgMELISAKit 人幽门螺旋杆菌IgM(Hp-IgM)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor5-(Human5-Nucleotidase)ELISAKit人5核苷酸酶

饮料阿斯巴塘(aspaame)含量薄层色谱法定性检测试剂盒20次

MouseMacrophageInflammatoryProtein3α,MIP-3αELISAKit小鼠巨噬细胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠卵巢微血管内皮细胞溴化乙锭   1g

EthidiumBromide(EB)   1ml(10mg/ml)

乙二醇   500ml

Ethyleneglycol

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后
，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，

，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。