老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）

，混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s
，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬

，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2
、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下
，用4% BSA封闭细胞30min
；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5

、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h
；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠脊髓神经干分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构
，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息
。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分
，在椎管里面

，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区
，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成
；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤
、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经干细胞是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。需要强调的是，在脑脊髓等所有神经组织中
，不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同，分布也不同。神经干细胞作为干细胞的一种，它具有其它所有干细胞的基本特征：具有自我维持和自我更新能力

，具有多种分化潜能
，具有分化为本系统大部分类型细胞的能力
，这种自我更新和分化潜能可以维持相当长的时间甚至终生，对损伤和疾病具有反应能力
。神经干细胞在疾病

、损伤状态下具有增殖、迁移，并向神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的能力，已成为神经系统损伤修复和再生研究的热点

，体外建立稳定的神经干细胞培养模型是其基础和临床应用的前提。神经干细胞在培养3-4d后，可形成神经球
，神经球在培养基中呈悬浮生长。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠脊髓神经干采用消化后差速贴壁，结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来，总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠脊髓神经干经Nestin免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1
、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

培养基 含B-27 Supplement
、EGF
、bFGF
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 球形

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%
，Accutase

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担
。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态
。因运输问题
，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养
。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。

公司正在出售的产品：

大鼠凋亡相关因子配体(FASL)检测试剂盒 ，英文名： FASL ELISA Kit

Porcine orexin receptor (OXR) ELISA Kit 猪食欲素受体(OXR)检测试剂盒

大豆特定基因序列(Lectin)核酸检测试剂盒 48T

CLIAKitforLTB(Humanheat-labileeerotoxinBsubunit)ELISAKit人不耐热肠毒素B亚单位

添加剂同酸比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitIgG鸡免疫球蛋白G

CD302重组大鼠 CD302 / CLEC13A 蛋白 (Fc 标签) Protein

Eukaryotic aspartyl protease(Rice 0.5mgEukaryotic aspartyl protease(Rice) 天冬蛋白酶家族蛋白(水稻蛋白的一种)(抗原)

FLT1重组人 VEGFR1 / FLT-1 蛋白 Protein

CCL24 Protein Human 重组人 CCL24 / Eotaxin-2 / MPIF-2 蛋白

CA9 Protein Mouse 重组小鼠 Carbonic Anhydrase IX / Car9 蛋白

Eukaryotic aspartyl protease(Rice 0.5mgEukaryotic aspartyl protease(Rice) 天冬蛋白酶家族蛋白(水稻蛋白的一种)(抗原)

CCL24 Protein Human 重组人 CCL24 / Eotaxin-2 / MPIF-2 蛋白

CD302重组大鼠 CD302 / CLEC13A 蛋白 (Fc 标签) Protein

CA9 Protein Mouse 重组小鼠 Carbonic Anhydrase IX / Car9 蛋白

FLT1重组人 VEGFR1 / FLT-1 蛋白 Protein

小鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human Coxsackie virus IgG (Cox V-IgG) ELISA Kit 人柯萨奇病毒IgG(Cox V-IgG)检测试剂盒

Humaacrolimus-FK506ELISAKit 人(FK506)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor8-epi-PGF2Alpha(Human8-epi-prostaglandinF2alpha0ELISAKit人8-异构前列腺素F2α

异柠檬酸待测样品处理试剂盒20次

MouseMethylaseELISAKit小鼠甲基化酶(Methylase)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠脊髓神经干细胞血管内皮生长因子受体2   英文名称
：   Rat Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2   规格
：      英文缩写：   VEGF-R2

大鼠氧化酶   英文名称
：   Xahine oxidase   规格
：      英文缩写：   XOD

小鼠肌动蛋白β   英文名称
：   Mouse Actin β   规格：      英文缩写
：   ACTβ

小鼠酰化刺激蛋白   英文名称：   Mouse Acylation Stimulating Protein   规格：      英文缩写：   ASP