老哥俱乐部

细胞简介：

大鼠肌腱干分离自肌腱组织；肌腱是肌腹两端的索状或膜状致密结缔组织
，便于肌肉附着和固定。一块肌肉的肌腱分附在两块或两块以上的不同骨上，是由于肌腱的牵引作用才能使肌肉的收缩带动不同骨的运动。每一块骨骼肌都分成肌腹和肌腱两部分，肌腹由肌纤维构成，色红质软，有收缩能力，肌腱由致密结缔组织构成，色乳白较硬
，没有收缩能力
。肌腱把骨骼肌附着于骨骼。长肌的肌腱多呈圆索状，阔肌的肌腱阔而薄，呈膜状
，又叫腱膜。此处的肌腹即为通常所说的红肌，而肌腱即为白肌
，分别控制肌肉的力量
、爆发力和耐力
。肌腱干细胞（TSCs）是一种来源于肌腱组织的间充质干细胞
，其具有多向分化潜能，并且在外源性前列腺素E2作用下异常分化。体外培养时该细胞群具有克隆形成能力、自我更新及多向分化潜能等干细胞的普遍特性。肌腱干细胞可以被诱导向脂肪细胞、软骨样细胞
、骨细胞分化；在裸鼠模型中，肌腱干细胞还可以形成肌腱样组织
，软骨样组织以及腱-骨连接样组织等。相比骨髓间充质干细胞而言
，TSCs具有更好的克隆形成能力和增殖能力
，软骨相关基因和肌腱相关基因表达更高
，具有更好的成骨、成脂和成软骨能力
，因此可以作为组织工程中的种子细胞。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肌腱干采用胶原酶

、混合消化法并通过肌腱干细胞专用培养基培养筛选制备而来

，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肌腱干经CD44免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV
、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息
：

培养基 含FBS、生长添加剂
、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形
、多角形

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气
，95%；CO2，5%

实验报告：

一、分离与培养
：

1
、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次
，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min
，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置
，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1

、待心房肌细胞生长至80%融合时

，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2

、PBS冲洗细胞2次

，每次10min，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min
；

3

、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h

；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品

：

人组胺(HIS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人抵抗素(Resistin)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

人骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人骨钙素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豚鼠环0酸鸟苷(cGMP)试剂盒 ，英文名
： cGMP ELISA Kit

Human hepatitis D virus IgG (HDV IgG) ELISA Kit 人丁型肝IgG(HDV IgG)试剂盒

MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 猴载脂蛋白B100(apo-B100)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforbFGF-4ELISAKit大鼠碱性成纤维细胞生长因子4

细菌色酶比色法定量试剂盒20次

RabbitIerleukin17,IL-17ELISAKit兔白介素17(IL-17)试剂盒规格：96T/48T

B18R重组牛痘病毒 B18R / B19R 蛋白 Protein

TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 0.5mgTIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金属蛋白酶组织抑制因子-2(抗原)

TIGIT重组人 TIGIT / VSTM3 蛋白 Protein

IL20RA Protein Human 重组人 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (ECD, Fc 标签)

MAPK14 Protein Human 重组人 p38 alpha / MAPK14 蛋白

TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 0.5mgTIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金属蛋白酶组织抑制因子-2(抗原)

IL20RA Protein Human 重组人 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (ECD, Fc 标签)

B18R重组牛痘病毒 B18R / B19R 蛋白 Protein

MAPK14 Protein Human 重组人 p38 alpha / MAPK14 蛋白

TIGIT重组人 TIGIT / VSTM3 蛋白 Protein

大鼠肌腱干细胞小鼠β内啡肽受体(β-EPR)ELISA 试剂盒

Human vitamin B6 (VB6) ELISA Kit 人B6(VB6)试剂盒

HumanCollagenaseTypeIIELISAKit 人胶原酶II(CollagenaseII)试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanc-fos试剂盒人c-fos试剂盒规格
：96T/48T

转基因玉米MON863品系基因定量试剂盒20次

Humanserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit人丝/苏蛋酸酶(STK)试剂盒规格：96T/48T

注意事项
：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好

，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养

。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系
，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决

。

7. 该细胞仅供科研使用

。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。