老哥俱乐部

细胞简介
：

大鼠呼吸道上皮分离自呼吸道；呼吸道是肺呼吸时气流所经过的通道
，有肺脊椎动物的呼吸道分上、下两部：鼻
、咽和喉合称上呼吸道
。气管及其以后一分再分的管道
，合称为下呼吸道
，或称为气管树

。气管树是随着动物的进化逐渐复杂化的。整个呼吸道内表面都分布有分泌液和纤毛（鼻孔
、咽后壁和声带黏膜除外）
，它能温暖（或冷却）、湿润和净化吸入的空气，对于呼吸器官和机体有着保护作用。呼吸道以骨或软骨做支架

，其内表面覆盖着黏膜
，黏膜内分布着丰富的毛细血管
。呼吸道上皮细胞属于假复层纤毛柱状上皮，分布于呼吸道的内表面，主要由柱状
，杯形

，梭形和锥形等不同形状细胞组成
。看上去像复层上皮，但实际上所有细胞底部均附于基膜上，属单层上皮，故称假复层柱状上皮，上皮表面有纤毛，杯状细胞可分泌粘液，包裹着大量细菌，借助纤毛不断摆动将其慢慢移动至出消化道。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠呼吸道上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠呼吸道上皮经pan-cytokeratin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上
，且不含有HIV-1
、HBV
、HCV
、支原体、细菌、酵母和真菌等
。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传1-2代

消化液 0.25%

培养条件 气相
：空气，95%；CO2
，5%

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织
，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小
；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶）
，混悬10s

，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清
，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置
；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化；

4
、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液
，1200r/min 离心10min
，弃去上清
，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5
、差速贴壁1h后
，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定
：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min

，然后在4℃条件下
，用0.1％Triton X-100透膜15min

；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min
；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗
，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h；

6
、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

公司正在出售的产品
：

大鼠胆囊收缩素(CCK)检测试剂盒 ，英文名： CCK ELISA Kit

Porcine platelet activating factor (PAF) ELISA Kit 猪血小板活化因子(PAF)检测试剂盒

ELISA 小鼠Active Caspase-7  进口分装

CLIAKitforLPLELISAKit大鼠脂蛋白脂酶

通用型1毫升1厘米光径玻璃比色皿1个

ELISAKitDEV鸡病毒性肠病毒

SERPINA11重组小鼠 SerpinA11 蛋白 Protein

cath-L/CL peptide 组织蛋白酶L抗原 0.5mgcath-L/CL peptide 组织蛋白酶L抗原

CSF1R重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 标签) Protein

CCL21 Protein Human 重组人 CCL21 / 6Ckine 蛋白

PDGFRA Protein Rat 重组大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白

cath-L/CL peptide 组织蛋白酶L抗原 0.5mgcath-L/CL peptide 组织蛋白酶L抗原

CCL21 Protein Human 重组人 CCL21 / 6Ckine 蛋白

SERPINA11重组小鼠 SerpinA11 蛋白 Protein

PDGFRA Protein Rat 重组大鼠 PDGFRa / CD140a 蛋白

CSF1R重组人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (His & GST 标签) Protein

小鼠诱导型合成酶(iNOS)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai ophoblast aibody (ATA) ELISA Kit 人抗滋养膜细胞抗体(ATA)检测试剂盒

Humanlambdaimmunoglobulinlightchain,λ-IgLCELISAKit 轻链lambda(λ-IgLC)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitfor8-OHdGELISAKit大鼠8羟基脱氧鸟苷

乙酰酯酶活性抑制剂筛选比色法检测试剂盒20次

MouseMucin-7,MUC7ELISAKit小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠呼吸道上皮细胞血管生长素   英文名称
：   Angiogenin   英文缩写：   ANG   规格
：  

血管生成素-2   英文名称：   Angiopoietin-2   英文缩写
：   ANG2   规格：  

血管生成素相关生长因子   英文名称：   Angiopoietin Growth Factors   英文缩写
：   AGF   规格

：  

载脂蛋白P   英文名称：   Apolipoprotein P   英文缩写
：   ApoP   规格

：

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系
。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息
，如细胞形态
、所用培养基
、血清比例
、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面
，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h
。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min

，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片

，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况
，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1：2传代 。

9.注意
： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿
。