實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠骨髓單個核分離自骨髓 ；骨髓是機體的造血組織 ，位於身體的許多骨骼內 。成年動物的骨髓分兩種 ：紅骨髓和黃骨髓 。紅骨髓能製造紅細胞 、血小板和各種白細胞 。血小板有止血作用 ，白細胞能殺滅與抑製各種病原體 ，包括細菌 、病毒等 ；某些淋巴細胞能製造抗體 。因此 ，骨髓不但是造血器官 ，它還是重要的免疫器官 。骨髓是存在於長骨（如肱骨 、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀鬆骨質間的網眼中 ，是一種海綿狀的組織 ，能產生血細胞的骨髓略呈紅色 ，稱為紅骨髓 。出生時 ，紅骨髓充滿全身骨髓腔 ，隨著年齡增大 ，脂肪細胞增多 ，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代 ，最後幾乎隻有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓 。骨髓單個核細胞是骨髓中具有單個核的細胞 ，包括淋巴細胞和單核細胞 。注意這裏是（mononuclear cell）單個核細胞 ，而不是（Monocyte）單核細胞 。單個核細胞的體積 、形態和比重與骨髓其他細胞不同 ，利用一定比例聚蔗糖和鈉形成的等滲溶液作密度梯度離心 ，使一定密度的細胞按相應密度梯度分布 ，可將各種血細胞與單個核分離 。

方法簡介 ：

公司實驗室分離的大鼠骨髓單個核采用取骨髓 、通過密度梯度離心法製備而來製備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶 。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠骨髓單個核經過檢測 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 半貼壁半懸浮

細胞形態 圓形

傳代特性 不增殖 ；不傳代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係 。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min ， ，用新鮮的*培養基重懸細胞 ，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態 ，便於和我司技術部溝通交流。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

大鼠肺病毒抗體(PV-Ab)檢測試劑盒  ，英文名 ： PV-Ab ELISA Kit

Porcine tissue inhibitors of metalloproteinase 1 (TIMP-1) ELISA Kit 豬基質金屬蛋白酶抑製因子1(TIMP-1)檢測試劑盒

轉基因植物cry1A基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMASP(Humanmannanbindinglectinassociatedserineprotease)ELISAKit人甘露聚糖結合凝集素相關絲蛋白酶

體液氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒50次

ELISAKitCOX-2裸鼠環加氧酶2

FGFR3重組小鼠 FGFR3 / CD333 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 0.5mgCGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 ) 軟骨糖蛋白39(多肽)

PLAU重組人 Urokinase / PLAU (activated by trypsin) 蛋白 Protein

CCL14 Protein Human 重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (aa 28-93, His 標簽)

LCN2 Protein Mouse 重組小鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 0.5mgCGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 ) 軟骨糖蛋白39(多肽)

CCL14 Protein Human 重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (aa 28-93, His 標簽)

FGFR3重組小鼠 FGFR3 / CD333 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

LCN2 Protein Mouse 重組小鼠 LCN2 / NGAL 蛋白

PLAU重組人 Urokinase / PLAU (activated by trypsin) 蛋白 Protein

小鼠脂聯素(ADP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai hepatitis B virus surface aibody (HBsAb) ELISA Kit 人抗乙型肝病毒表麵抗體(HBsAb)檢測試劑盒

HumanactivatedproteinCresistance,APCRELISAKit 人活化蛋白C抵抗素(APCR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforABAb(Rabbitai-braiissueaibody)ELISAKit兔抗腦組織抗體

(0.25%)乙四乙酸混合液100毫升

Mouseneuophilelastase,NEELISAKit小鼠中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠骨髓單個核細胞血糖含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

植物可溶性糖含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

糖原含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

海藻糖含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣