老哥俱乐部

实验报告
：

一
、分离与培养：

1、无菌条件下
，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2
、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液

，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液

，1200r/min 离心10min

，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶
，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养
；

5
、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二
、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min
；

2、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4
、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次
，每次10min
，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h

；

6
、用PBS冲洗3次
，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介
：

大鼠肝动脉平滑肌分离自肝动脉组织；在胚胎期，肝脏有3条动脉供血，分别来源于胃左动脉、腹腔动脉和肠系膜上动脉
，这3条动脉分别的不同部位
。出生后，一般保留一条动脉，大部分为起源于腹腔动脉的动脉，由其分出左
、右肝动脉供应左、右半肝
。偶尔也可见起源于胃左动脉的动脉或起源于肠系膜上动脉的动脉
。但也有2条动脉并存的情况，如起源于腹腔动脉和起源于胃左动脉（25%）
，起源于腹腔动脉和起源于肠系腊上动脉（10%），而起源于胃左动脉和起源于肠系膜上动脉的2条动脉同时存在的情况比较少见。此外，还有5%像胚胎期一样
，3条动脉同时存在
。这种起源于腹腔动脉以外的肝动脉称为迷走肝动脉

，如果肝脏没有起源于腹腔动脉的动脉供血时，此种异位起源的肝动脉称替代动脉
，如果在常见肝动脉类型外，还有一支这种异位起始的动脉的一部分血流
，这种肝动脉称副肝动脉
。肝动脉平滑肌细胞是肝动脉的重要结构细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。肝动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形
、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏

；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时

，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快
，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。血管平滑肌细胞的加速生长潜能是血管疾病进展的关键因素，研究表明血管平滑肌细胞表达的ICAM-1和VCAM-1能促进血管壁的炎症反应，并且与血管疾病的发展及稳定性有关。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠肝动脉平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来
，细胞总量约为5×10?cells/瓶
。

质量检测

公司实验室分离的大鼠肝动脉平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1

、HBV、HCV、支原体
、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS

、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液
、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等
，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题
，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面

，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片
，是正常现象
。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm离心3 min，弃上清。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，
，用新鲜的*培养基重悬细胞
，并接种到新的培养瓶或培养皿中
，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养
。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片
，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况
，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决
。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议1

：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿
。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠0酸二酯酶3A(PDE3A)检测试剂盒 ，英文名： PDE3A ELISA Kit

Mouse hepatitis B virus surface aigen (HBsAg) ELISA Kit 小鼠乙型肝表面抗原(HBsAg)检测试剂盒

Rat15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit 大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGATA4MouseGATAbindingprotein4)ELISAKit小鼠GATA结合蛋白4

细胞过氧化物酶(GSHPX)活性酶动力比色法定量检测试剂盒20次

Ratpyridiniumcrosslink/PyriLinks,PYELISAKit大鼠交联物(PY)检测试剂盒规格
：96T/48T

SEMA4D重组食蟹猴 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 Protein

IL-10(Interleukin-10 0.5mgIL-10(Interleukin-10) 白介素10(白细胞介素-10)(抗原)

PDZD11重组人 PDZD11 / PDZK11 / PISP 蛋白 Protein

FABP7 Protein Human 重组人 BLBP / FABP7 蛋白

BCAM Protein Mouse 重组小鼠 BCAM 蛋白 (Fc 标签)

IL-10(Interleukin-10 0.5mgIL-10(Interleukin-10) 白介素10(白细胞介素-10)(抗原)

FABP7 Protein Human 重组人 BLBP / FABP7 蛋白

SEMA4D重组食蟹猴 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 蛋白 Protein

BCAM Protein Mouse 重组小鼠 BCAM 蛋白 (Fc 标签)

PDZD11重组人 PDZD11 / PDZK11 / PISP 蛋白 Protein

小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白M(IgM)检测试剂盒

HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit 人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

Humanai-presynapticmembraneaibody,PsmAb检测试剂盒人抗突触前膜抗体(PsmAb)检测试剂盒规格：96T/48T

植物细胞染色体分离试剂盒20次

HumaumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit人特异生长因子/相关因子(TGSF)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠T细胞活化连接蛋白检测试剂盒   小鼠T细胞活化连接蛋白试剂盒   规格型号
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，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠T细胞活化连接蛋白试剂盒、小鼠T细胞活化连接蛋白eisa试剂盒   保存条件
：2-8℃   保质期
：6个月
。

小鼠E选择素检测试剂盒   小鼠E选择素试剂盒   规格型号

：96T/48T   小鼠E选择素试剂盒，规格型号：96T/48T
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：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠E选择素试剂盒、小鼠E选择素eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠E钙粘着蛋白检测试剂盒   小鼠E钙粘着蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠E钙粘着蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源
：检测试剂盒（进口分装），产品别名
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：2-8℃   保质期：6个月
。

小鼠D-乳酸脱氢酶检测试剂盒   小鼠D-乳酸脱氢酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠D-乳酸脱氢酶试剂盒，规格型号

：96T/48T
，来源：检测试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠D-乳酸脱氢酶试剂盒、小鼠D-乳酸脱氢酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期
：6个月
。