實驗報告 ：

一 、分離與培養 ：

1 、無菌條件下 ，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織 ，然後用PBS將此組織塊清洗2次 ，將組織剪成1mm3左右大小 ；

2 、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶） ，混懸10s ，置37℃條件下消化10min ，之後用滴管吹打製成單細胞懸液 ，自然沉澱並收集上清 ，用含10% FBS培養基終止消化後4℃放置 ；

3 、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液 ，混懸10s ，置37℃消化10 min後 ，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置 ，重複此步驟2-3次 ，直至組織被消化 ；

4 、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液 ，1200r/min 離心10min ，棄去上清 ，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸 ，接種於25cm2培養瓶 ，放置於37℃  ，5％CO2 培養箱中培養 ；

5 、差速貼壁1h後 ，吸出培養基 ，按實驗需要接種於6孔板中繼續培養 ；二 、免疫熒光鑒定 ：

1 、待心房肌細胞生長至80%融合時 ，棄去培養基 ，用溫育的PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min ；

2 、PBS衝洗細胞2次，每次10min ，然後在4℃條件下 ，用0.1％Triton X-100透膜15min ；

3 、PBS衝洗細胞2次 ，每次10min ，然後在室溫條件下 ，用4% BSA封閉細胞30min ；

4 、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗 ，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜 ；

5 、PBS衝洗細胞3次 ，每次10min ，按1 ：150的比例稀釋抗α-actin的二抗 ， 37℃條件下放置1h ；

6 、用PBS衝洗3次 ，每次10min ，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照 。

細胞簡介 ：

大鼠腹膜間皮分離自腹膜組織 ；腹膜是存在於高等脊椎動物腹腔中的一層黏膜 ，主要由間皮細胞構成 ，藉由結締組織的支持所形成的一層膜狀組織 。腹膜包覆大部分腹腔內的器官 ，能分泌黏液潤濕髒器的表麵，減輕髒器間的摩擦 。腹腔髒器的血液 、淋巴和神經組織經由腹膜與外界相連 ；腹膜也具有吸收撞擊保護內髒的效果 。腹膜（peritoneum）為全身麵積最大 、配布最複雜的漿膜 ，由皮及少量結締組織構成 ，薄而光滑 ，呈半透明狀 。襯於腹 、盆腔壁內表麵的腹膜稱為壁腹膜（parietal-peritoneum）或腹壁薄層 ；覆蓋腹 、盆腔器表麵的部分稱為髒腹膜（visceral-peritoneum）腹膜或腹膜髒層 。髒腹膜與壁腹膜互相延續 、移行 ，共同圍成不規則的潛在性腔隙 ，稱為腹膜腔（peritoneal-cavity） 。腹膜腔是髒 、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙 。腹膜腔內有少量漿液 ，在髒器活動時可減少摩擦 。腹膜間皮細胞屬於上皮組織中的單層扁平上皮 ，是覆蓋於腹膜表麵的一層細胞 。間皮細胞是構成間皮的細胞 ，正常大小約為15-25微米 ，細胞常呈圓形或者卵圓形 。其功用是提供潤滑 ，使器官與器官 、器官與胸膜與腹膜間都能得到良好的保護 ，不會互相磨損受傷 。而間皮所生產的潤滑和保護作用就是靠間皮細胞所分泌的物質來達成 ，分泌物多半為細胞外基質 、玻尿酸類物質 。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠腹膜間皮采用混合膠原酶消化法製備而來 ，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠腹膜間皮經PCK 、Vimentin免疫熒光鑒定 ，純度可達90%以上 ，且不含有HIV-1 、HBV 、HCV 、支原體 、細菌 、酵母和真菌等 。

培養信息 ：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含FBS 、生長添加劑 、Penicillin 、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相 ：空氣 ，95% ；CO2 ，5%

注意事項 ：

1. 收到細胞後首先觀察細胞瓶是否完好 ，培養液是否有漏液 、渾濁等現象 ，若有上述現象發生請及時和老哥俱樂部聯係。

2. 仔細閱讀細胞說明書 ，了解細胞相關信息 ，如細胞形態 、所用培養基 、血清比例 、所需細胞因子等 ，確保細胞培養條件一致 ，若由於培養條件不一致而導致細胞出現問題 ，責任由客戶自行承擔 。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表麵 ，顯微鏡下觀察細胞狀態 。因運輸問題 ，部分細胞由於溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片 ，是正常現象 。觀察好細胞狀態後 ，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於37℃培養箱放置4-6h 。

4. 貼壁細胞可以消化 ，懸浮細胞直接混勻收集細胞 ，900 rpm-1000 rpm離心3 min ，棄上清 。加5 mL PBS重懸細胞 ，再900 rpm-1000 rpm離心3 min， ，用新鮮的*培養基重懸細胞，並接種到新的培養瓶或培養皿中 ，置於培養箱中進行培養 。

5. 請客戶用相同條件的培養基用於細胞培養 。

6. 建議客戶收到細胞後前3天各拍幾張細胞照片 ，記錄細胞狀態，便於和我司技術部溝通交流 。由於運輸的原因 ，個別敏感細胞會出現不穩定的情況 ，請及時和老哥俱樂部聯係 ，告知細胞的具體情況 ，以便老哥俱樂部的技術人員跟蹤回訪直至問題解決 。

7. 該細胞僅供科研使用 。

8. 備注 ：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞 ，請換用按照說明書細胞培養條件新配製的*培養基來培養細胞 。收到細胞後次傳代建議1 ：2傳代  。

9.注意 ： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿 。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 。

公司正在出售的產品 ：

小鼠皮質酮/腎上腺酮(CO)ELISA 試劑盒

Prothrombin fragme F1+2 (F1+2) ELISA Kit 人原片段F1+2(F1+2)檢測試劑盒

HumanCollagenaoaibody,CLAELISAKit 人抗膠原蛋白抗體(CLA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human1,3-Disphosphoglycerate,1,3-DPG檢測試劑盒人1,3-二0酸甘油酸(1,3-DPG)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞線粒體粗提分離試劑盒10次

MouseAzidothymidine,AZTELISAKit小鼠(AZT)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

IGFBP4重組食蟹猴 IGFBP4 蛋白 Protein

Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原 0.5mgMelan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)

PDE9A重組人 PDE9A 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CBFB Protein Human 重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白

KLK7 Protein Mouse 重組小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 蛋白

Melan-A/MART-1 黑色素-A(抗原 0.5mgMelan-A/MART-1 黑色素-A(抗原)

CBFB Protein Human 重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白

IGFBP4重組食蟹猴 IGFBP4 蛋白 Protein

KLK7 Protein Mouse 重組小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 蛋白

PDE9A重組人 PDE9A 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human deoxyribonucleic protein aibody (DNP-Ab) ELISA Kit 人抗脫氧核糖核蛋白抗體(DNP-Ab)檢測試劑盒

Humangasieceptor,GsaRELISAKit 人促胃液素受體(GsaR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforACA-IgMELISAKit大鼠抗心0脂抗體IgM

藥品乙酸比色法定量檢測試劑盒20次

Mouseoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

大鼠腹膜間皮細胞鴨γ幹擾素(IFN-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠活化素A受體抗體(ACV-RAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠腦紅蛋白(NGB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠血小板生成素(TPO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T