老哥俱乐部

实验报告：

一、分离与培养：

1
、无菌条件下

，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3
、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后

，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次
，直至组织被消化
；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min
，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬
，接种于25cm2培养瓶

，放置于37℃ 
，5％CO2 培养箱中培养
；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基
，用温育的PBS冲洗细胞2次
，每次10min
，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5
、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1
：150的比例稀释抗α-actin的二抗
， 37℃条件下放置1h
；

6、用PBS冲洗3次，每次10min
，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

细胞简介

：

大鼠鼻黏膜上皮分离自鼻黏膜组织；黏膜是覆盖在机体内消化
、呼吸
、泌尿、生殖等器官管腔内壁的一层组织结构，由上皮组织和疏松结缔组织构成
。根据部位不同，有口腔黏膜、胃肠黏膜、鼻腔黏膜、气管黏膜、阴道黏膜、眼睑黏膜等不同名称。它们的结构也因功能

、部位不一而不尽相同。鼻腔黏膜，简称鼻黏膜，覆盖于鼻腔表面
，黏膜下方为软骨、骨或骨骼肌。根据结构与功能的不同，鼻黏膜又分为前庭部、呼吸部和嗅部三部分
。前庭部是邻近外鼻孔的部分
，有丰富的鼻毛可以阻挡空气中较大的尘粒吸入。呼吸部占鼻黏膜的大部
，有发达的上皮纤毛，它们可向咽部摆动，黏着有尘粒、细菌的黏液排向咽部，最终将它们排出体外。此外，此部分有丰富的血管与腺体
，对吸入的空气有加温和湿润作用。嗅部黏膜范围较小
，主要位于鼻腔顶部。它含有一种专司嗅觉的嗅细胞及嗅腺
，它们分泌能溶解到达嗅区的含气味的微粒，刺激嗅细胞表面上的嗅毛产生嗅觉
，而且还由于嗅细胞具有不同的受体
，可分别接受不同化学分子的刺激，因此可产生不同的嗅觉
。

方法简介：

实验室分离的大鼠鼻黏膜上皮采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法
，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来
，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测

实验室分离的大鼠鼻黏膜上皮经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定
，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌


、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件
：鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基：含FBS

、EGF、Hydrocortisone
、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%

培养条件：气相
：空气
，95%；CO2，5%

大鼠鼻黏膜上皮体外培养周期有限
；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的好培养状态
。

注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象
，若有上述现象发生请及时和老哥俱乐部联系。

2. 仔细阅读细胞说明书
，了解细胞相关信息，如细胞形态
、所用培养基、血清比例

、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致

，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。

3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置4-6h。

4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞
，900 rpm-1000 rpm离心3 min
，弃上清
。加5 mL PBS重悬细胞
，再900 rpm-1000 rpm离心3 min，，用新鲜的*培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态
，便于和我司技术部沟通交流
。由于运输的原因
，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和老哥俱乐部联系，告知细胞的具体情况，以便老哥俱乐部的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞
，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞
。收到细胞后次传代建议1
：2传代 。

9.注意： 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿。

公司正在出售的产品：

大鼠肌钙蛋白T(Tn-T)检测试剂盒 ，英文名
： Tn-T ELISA Kit

Rabbit Bcl-2 associated X protein (BAX) ELISA Kit 兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)检测试剂盒

牛(BCV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

CLIAKitforMouseSlit2ELISAKit小鼠Slit2

体液钙离子浓度比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKit6-K-PG人6同前列腺素

SFRP2重组小鼠 sFRP2 蛋白 Protein

C-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun
：active protein 1 0.5mgC-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun
：active protein 1) 原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)

APEX1重组人 APEX1 / AP / APEx / Ref-1 蛋白 Protein

CAMK1G Protein Human 重组人 CAMK1G / CLICK III / CaMKIgamma 蛋白 (His & GST 标签)

MCPT1 Protein Mouse 重组小鼠 MCPT1 蛋白

C-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun
：active protein 1 0.5mgC-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun
：active protein 1) 原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)

CAMK1G Protein Human 重组人 CAMK1G / CLICK III / CaMKIgamma 蛋白 (His & GST 标签)

SFRP2重组小鼠 sFRP2 蛋白 Protein

MCPT1 Protein Mouse 重组小鼠 MCPT1 蛋白

APEX1重组人 APEX1 / AP / APEx / Ref-1 蛋白 Protein

鸭胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human ai hCG aibody (AhCGAb) ELISA Kit 人抗人绒毛膜抗体(AhCGAb)检测试剂盒

HumanMotilin,MTLELISAKit 人胃动素(MTL)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAcSDKPELISAKit大鼠N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯

血影细胞膜荧光染色试剂盒20次

Mouseplateletfactor3,PF3ELISAKit小鼠血小板因子3(PF-3)检测试剂盒规格：96T/48T

大鼠鼻黏膜上皮细胞（NO）测定试剂盒（还原酶法）

超氧化物歧化酶（SOD）分型测试盒（羟胺法）

微量二（MDA）测定试剂盒（TBA法）

—S转移酶（GSH-ST）试剂盒（比色法）