老哥俱乐部

产品仅供研究使用
，不适用于人类或临床诊断
商品属性
：

产品英文名称：Human GDF3 Protein

产品中文名称：重组人生长分化因子 3（GDF3）

规格
：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

货号：EY-01X8708
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

标签:无标签

表达宿主:大肠杆菌

种属:人

序列:氨基酸序列来源于
：人源GDF 3(Q9NR23) (Ala251-Gly364)表达的蛋白片段。

蛋白长度：重组人 GDF 3 由 141 个氨基酸组成，预计分子质量为 13 kDa。

纯度:> 96 % ，使用SDS-PAGE检测

采用 LAL 法检测

，每 1 μg 蛋白质中的 EU 含量小于 1.0。

产品形式:冻干粉，冻干缓冲液为无菌的 150mM NaCl 20mM Tris , pH 8.0溶液。

基因ID:9573

使用中注意事项:开盖使用前
，动겸动

背景

GDF-3（以前称为 Vgr-2）是一种 TGF-beta 超家族成员，属于生长/分化因子家族。因子家族的成员
。GDF-3 在未分化的胚胎干（ES）细胞、白色脂肪组织和大脑中表达
。366氨基酸（aa）的小鼠 GDF-3 含有 22 aa 的信号序列:
、230 aa 的前肽和 114 aa 的成熟蛋白。含有一个潜在的 N-糖基化位点。成熟区包含一个半胱结结构，该结构在整个的半胱结结构。然而，它缺少负责形成分子间二硫键的第四个半胱
，因此 GDF-3 可能存在一个 N.键，因此 GDF-3 可能以非共价的同源二聚体形式存在。成熟的人类 GDF-3 与小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83% 和 83% aa 的序列:相同性
。小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83%
、83% aa 的序列:相同性。大部分 GDF-3 以未水解的前体形式存在。未加工的前体和成熟的前体似乎都有活性:，但活性:可能有所不同。所有形式都能对抗 BMPs。在 ES 细胞中
，抑制 BMP2 信号传导的GDF-3 可维持多能性。GDF-3 还影响早期细胞命运的决定；例如
，缺失小鼠 GDF-3会导致胃前期胚胎的前内脏内胚层出现缺陷。在胚胎发生过程中
，GDF-3 与 GDF-1 相互合作。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷
。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全
。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成

。

操作步骤
：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2
、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点
。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2

、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析
。

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