老哥俱乐部

产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断
商品属性
：

产品英文名称
：Human TGF-β protein，His tag

产品中文名称：重组人转化生长因子-β，His-标签TGF-β

规格
：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

货号
：EY-01X8682
用途
：仅供科研研究实验

特点&优势:

标签C-His

表达宿主:大肠杆菌

种属:人

序列:氨基酸序列来源于人源：TGF-β1（Met 278-Asn 390）(P01137)表达的蛋白片段
，在 C 端用 6×His 标记表达。

活性:通过其抑制il -4诱导HT-2细胞增殖的能力来测定。这种效应的 ED₅₀ <0.1 ng/mL
。重组人 TGF beta 1 的特异性活性:约大于 5 x 10⁷ IU/mg
。以其诱导 MCF-7 细胞增殖的能力来衡量。该效应的 ED₅₀ 值为 <3.2 ng/mL。

蛋白长度：该蛋白质的计算分子量为 13.7动겸动

背景

转化生长因子 beta（TGF beta）家族的细胞因子无处不在，具有多种功能
，对生存至关重要

。它们在生长、发育、炎症
、修复和宿主免疫中发挥着核心作用。哺乳动物的 TGF beta 异构体（TGF beta 1、beta 2 和 beta 3）作为潜在的前体分泌，拥有多种细胞表面受体，并产生至少两种介导信号转导的受体
。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物
。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
公司正在出售的产品：

BKCa channels(calcium-activated potassium channel 0.5mgBKCa channels(calcium-activated potassium channel) 钙激活通道蛋白

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HumaypeⅡcollagenhelicalpeptide
，HELIX-ⅡELISAKit人Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)检测试剂盒规格：96T/48T

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：      英文缩写
：   MIF

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：   Macrophage Inflammatory protein 1   规格：      英文缩写
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小鼠巨噬细胞性蛋动겸动

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RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit 大鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)检测试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforGHELISAKit大鼠释放激素

细胞酶3(PON3)活性荧光定量检测试剂盒

Ratthioredoxieductase,xRELISAKit大鼠硫氧还蛋白还原酶(xR)检测试剂盒规格
：96T/48T

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BKCa channels(calcium-activated potassium channel 0.5mgBKCa channels(calcium-activated potassium channel) 钙激活通道蛋白

VDR重组人 VDR / NR1I1 蛋白 Protein

CXCL1 Protein Human 重组人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & NusA 标签)

CLEC14A Protein Rat 重组大鼠 CLEC14A / EGFR-5 蛋白 (Fc 标签)

操作步骤
：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2
、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物
。

(二)构建重组表达载体

1
、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2
、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养
。

2
、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)
。

3
、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4
、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析

。