老哥俱乐部

产品仅供研究使用
，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

产品英文名称：Human  BAFF Protein

产品中文名称
：重组人B细胞激活因子（BAFF）

规格：50 μg/10 μg/1 mg

货号：EY-01X8657
用途
：仅供科研研究实验

特点&优势:

标签:无标签

表达宿主:大肠杆菌

种属:人

序列:氨基酸序列来源于

：人源BAF (Q9Y275-1) (Ala 134-Leu 285)表达的蛋白片段
。

活性:检测其与配体的结合能力
，检测的实验类型为功能性ELISA。包被的1 μg/mL(100μl/孔)人BAFF可与人BCMA(C-mFc)结合，人BCMA(C-mFc)的EC50为0.2 μg/mL。

蛋白长度
：重组人SHH由152个氨基酸组成，在N端有6×His标签
，预测分子质量为22.9 kDa。

纯度:> 98 % ，使用SDS-PAGE检测

采动겸动

背景

B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator, Blys)又称TNFSF13B、CD257、BAFF
，是一种单向II膜蛋白，属于肿瘤坏死因子家族
。BAFF在外周血白细胞中大量表达，特别在单核细胞和巨噬细胞中表达。BAFF是一种细胞因子
，可作为TNFRSF13B (TACI)、TNFRSF17 (BCMA)和TNFRSF13C (BAFFR)的容器。这些受体是B细胞分化、稳定和选择的重要因素
。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板

。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全
。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。

操作步骤
：

(一)获得目的基因

1
、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段
。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1
、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段
。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2
、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作
。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3
、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2
、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)
。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr
。

4
、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5
、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

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