老哥俱乐部

产品仅供研究使用
，不适用于人类或临床诊断
商品属性：

特点&优势:

•  能够在多种哺乳动物细胞类型中均匀染色细胞膜
，不论是活细胞和固定细胞，悬浮细胞或贴壁细胞。

•  针试剂盒针对各种荧光分析平台进行了优化，具有广泛的适用性，如荧光微孔板分析，流式细胞仪和荧光显微镜等
。

•  的CPM Orange•  (Ex/Em = 549/569 nm)-在膜内快速扩散，在用甲醛固定后也能保持染色，适用于荧光多标实验
。

保存建议:请参阅说明书中各个组分的存储条件。自发货之日起，在推荐温度下至少稳定6个月。

运输条件:蓝冰运输

背景

细胞膜(质膜)是一种薄的半透膜，由含有嵌入蛋白质的脂质双层组成
，将所有细胞的内部与环境隔开。细胞膜的基本功能是保护细胞免受周围环境的影响。细胞膜控制物质进出细胞和细胞器的运动
。这样
，它可选择性地渗透离子和有机分子。细胞膜参与多种细胞过程，如细胞粘附
、离子传导和细胞信号传导
，并作为几种细胞外结构的附着表面

，包括细胞壁

、糖萼和细胞内骨架

。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全

。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
公司正在出售的产品：

Adenylate Kinase 1 (AK-1 0.5mgAdenylate Kinase 1 (AK-1) 腺苷酸激酶-1

FCGR3A Protein Human 重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 标签), Biotinylated

FCGR4重组小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 标签) Protein

CLEC1A Protein Rat 重组大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白

FAM19A2重组人 FAM19A2 蛋白  Protein

小鼠二0酸腺苷(ADP)ELISA 试剂盒

Rat endostatin (ES) ELISA Kit 大鼠内皮抑素(ES)检测试剂盒

HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫaELISAKit 人活化Ⅻ(FⅫa)检测试剂盒 进口分装

Humanapoptosissignalregulatingkinase1,ASK-1检测试剂盒人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)检测试剂盒

植物乙醇酸氧化酶(glycolateoxidase)活性比色法定量检测试剂盒20次

Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase2
，TIMP-2ELISAKit人基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)检测试剂盒

(Fibrinogen)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

人 Foxp3(Foxp3)   作用
：   ELISA   规格
：      进口分装

半乳糖凝集素 7 （ Galectin-7 ）   作用：   ELISA   规格：      进口分装

胃泌素 (Gasin)   作用：   ELISA   规格：      进口分装

大鼠诱导型合酶(NOS2)检测试剂盒 ，英文名： NOS2 ELISA Kit

Mouse follistatin (FS) ELISA Kit 小鼠卵泡抑素(FS)检测试剂盒

Mousemaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAkit 小鼠基质金属蛋白酶3(MMP-3)检测试剂盒 进口分装

CLIAKitforHumanEamoebahistolyticaAigenELISAKit人痢疾内阿米巴抗原

细胞3-0酸甘油脱氢酶(GAPDH)活性酶动力比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitACV-RAb大鼠活化素A受体抗体

细胞膜染色试剂盒（橘红色荧光）FCGR4重组小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His & AVI 标签) Protein

Adenylate Kinase 1 (AK-1 0.5mgAdenylate Kinase 1 (AK-1) 腺苷酸激酶-1

FAM19A2重组人 FAM19A2 蛋白  Protein

FCGR3A Protein Human 重组人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His & AVI 标签), Biotinylated

CLEC1A Protein Rat 重组大鼠 CLEC1A / CLEC-1 蛋白

操作步骤：

(一)获得目的基因

1
、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段

。

2
、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作
。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1
、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

2
、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)
。

3
、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。