產品僅供研究使用，不適用於人類或臨床診斷
商品屬性 ：

產品英文名稱 ：Comet Assay Kit (3-Well Slides)

產品中文名稱 ：彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）

規格 ：15T/75T

貨號 ：EY-01X8530
用途 ：僅供科研研究實驗

特點&優勢:

•  試劑齊全 ：提供的彗星玻片 ；

•  操作簡便 ：無需用不同熔點瓊脂糖繁瑣鋪膠 ，可快速 、靈敏的檢測細胞 DNA 損傷 ；

•  可靠 ：相比於多層瓊脂糖 ，樣本不易脫落 。

保存建議:從發貨之日起 ，4℃ ，避光保存 6 個月

運輸條件:藍冰運輸

背景

彗星法 DNA 損傷分析試劑盒（3 孔載玻片）是一種單細胞凝膠電泳試驗（SCGE） ，快速 、靈敏的檢測細胞 DNA 損傷的試劑盒 。 其檢測原理是器官或組織經處理（如輻射 、重金屬等）後 ，細胞中的 DNA 發生單鏈或雙鏈斷裂 ，將細胞與融化的瓊脂糖混合加在載玻片上 ，然後用裂解液破壞細胞膜 ，再用堿性溶液使 DNA 解旋 ，後 ，對樣品進行電泳 ，在電場作用下 ，正常細胞的大分子 DNA 在電場作用下遷移距離較短 ，完整 DNA 仍保留在細胞核的範圍 ，DNA 斷裂碎片遷移出細胞核 ，用 PI 染料染色，在熒光顯微鏡下觀察 ，完整 DNA 形成圓形或輕微拖尾的圖譜 ；DNA 斷裂碎片形成彗星狀的電泳圖譜 。

本產品具有下列特點:

 1.操作簡便 、快捷 。可直接加入到檢測平板 。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟 。

2. 無放射性 。不需要配製液閃混合物,也不需要處理廢棄物 。

3. 與MTT相比,使用更安全 。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臢產物 。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數後可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成 。
公司正在出售的產品 ：

5(KLK5)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 5 (KLK5)

CPA1 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase A1 / CPA1 蛋白

CSF1重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

RBP4 Protein Canine 重組狗 RBP4 蛋白 (Fc 標簽)

FAM171B重組人 FAM171B / KIAA1946 蛋白 Protein

小鼠(LZM)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cysticercosis aibody (CYT Ab) ELISA Kit 人囊蟲病抗體(CYT Ab)檢測試劑盒

Humanvimein,VIMELISAKit 人波形蛋白(VIM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapigHistamine,HIS檢測試劑盒豚鼠組胺(HIS)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

真菌/酵母細胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

Mousecatecholamine,CAELISAKit小鼠兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

小鼠尿微量白蛋白（ALB）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠型纖溶酶原激活物(uPA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠尿蛋白（UP）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠Ⅵ(F6)檢測試劑盒  ，英文名 ： F6 ELISA Kit

Mouse thrombospondin / thrombin sensitive protein 1 (TSP-1) ELISA Kit 小鼠血小板反應蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)檢測試劑盒

Ratcross-linkedC-telopeptidesofTypeⅠcollagen,CⅠCPELISAKit 大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGOT/GPT(HumanAspaateaminoansferase)ELISAKit人天門冬轉氨酶/穀草轉氨酶

細胞短鏈脂酰氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Ratthrombomodulin,TMELISAKit大鼠血栓調節蛋白(TM)檢測試劑盒規格 ：96T/48T

彗星法DNA損傷分析試劑盒（3孔載玻片）CSF1重組小鼠 M-CSF / CSF-1 蛋白 Protein

5(KLK5)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 5 (KLK5)

FAM171B重組人 FAM171B / KIAA1946 蛋白 Protein

CPA1 Protein Human 重組人 Carboxypeptidase A1 / CPA1 蛋白

RBP4 Protein Canine 重組狗 RBP4 蛋白 (Fc 標簽)

操作步驟 ：

(一)獲得目的基因

1 、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上遊和下遊引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段 。

2 、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物 。

(二)構建重組表達載體

1 、載體酶切:將表達質粒用限製性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳後,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段 。

2 、PCR產物雙酶切後回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體 。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1 、 將連接產物轉化大腸杆菌DH5α,根據重組載體的標誌(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定 。

2 、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作 。否則應篩選更多克隆,重複亞克隆或亞克隆至不同酶切位點 。

3 、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞 。

(四)誘導表達

1 、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養 。

2 、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr) 。

3 、取部分液體作為未誘導的對照組,餘下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr 。

4 、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉澱,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min 。

5 、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析 。