老哥俱乐部

产品仅供研究使用

，不适用于人类或临床诊断
商品属性
：

产品英文名称：CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

产品中文名称
：CFDA SE 细胞增殖与示踪检测试剂盒

规格：200T×5/200T×10

货号

：EY-01X8526
用途：仅供科研研究实验

特点&优势:

•  CFDA SE探针可以在几代中很好地保留在活细胞中。

•  探针会转移到子细胞，但不转移到群体中的相邻细胞
。

•  兼容流式细胞仪或荧光显微镜等检测方法

• 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。

保存建议:收到货后，请避光保存于-20℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为12个月。

运输条件:蓝冰运输

背景

5(6)-CFDA, SE 是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞示踪染料
，不仅可用于细胞增殖的体外实验
，还可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程

。5(6)-CFDA, SE 是二乙酸荧光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具有细胞膜渗透性

，本身不具有荧光发光性。当通过被动运输穿透细胞膜进入活细胞后，被胞浆内的酯酶催化生成羧基荧光素琥珀酰亚胺（carboxyfluoresceinsuccinimidyl ester
，CFSE）


，可发强烈的绿色荧光，不能穿透细胞膜，能完好的保留在胞内
。CFSE 还可自发并不可逆地与细胞内的氨基结合从而偶联到细胞蛋白质上，同时过量且未被偶联的 5(6)-CFDA, SE 通过被动扩散回到细胞外培养基内，被后续清洗步骤所清除
。经 5(6)-CFDA, SE 标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数月，因此非常适用于细胞群落分析。5(6)-CFDA, SE 标记细胞的荧光非常均一
，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如 PKH26
，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也很均一
。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中
，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1 通道）根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞

，分裂一次（1/2 的荧光强度），二次（1/4 的荧光强度），三次（1/8 的荧光强度）
，以及更多分裂次数的细胞

。5(6)-CFDA, SE 可检测分裂次数多达八次甚至更多
。

本产品具有下列特点:

 1.操作简便、快捷。可直接加入到检测平板

。在96-孔板中检测时,无需洗涤或收获细胞,免去溶解步骤
。

2. 无放射性。不需要配制液闪混合物,也不需要处理废弃物。

3. 与MTT相比,使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物
。

4. 操作灵活,与MTT不同,平板读数后可放回温箱继续孵育,使颜色进一步生成。
公司正在出售的产品
：

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IgG Protein Rabbit 重组兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

操作步骤
：

(一)获得目的基因

1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

2
、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物
。

(二)构建重组表达载体

1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

(三)  获得含重组表达质粒的表达菌种

1
、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

(四)诱导表达

1

、挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养
。

2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)
。

3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr
。

4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

5
、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。