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(RT-3)牛副流感病毒3型RT-LAMP試劑盒

產品名稱 :(RT-3)牛副流感病毒3型RT-LAMP試劑盒

產品特點 :(RT-3)牛副流感病毒3型RT-LAMP試劑盒上海老哥俱樂部生物相關產品 :沒食子兒茶素沒食子酸酯; (-)-Gal 4233-96-9 20mg 訂購|谘詢

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毛萼結甲;

產品型號 :50次

更新日期 :2021-03-05

訪問次數 :596

50次(RT-3)牛副流感病毒3型RT-LAMP試劑盒的詳細資料 :

參數規格 :

產品名稱

(RT-3)牛副流感病毒3型RT-LAMP試劑盒

英文名稱

 (rt-3) RT-LAMP kit for bovine parainfluenza virus type 3

規格

50次

儲存條件 :
僅用於科研14℃或-20℃樣品收集 、處理及保存方法
1. 血清 :使用不含熱原和內毒素的試管 ,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液後 ,3000 轉離心10 分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離 。
2. 血漿 :EDTA 、檸檬酸鹽或肝素抗凝 。3000 轉離心30 分鍾取上清 。
3. 細胞上清液 :3000 轉離心10 分鍾去除顆粒和聚合物 。
4. 組織勻漿 :將組織加入適量生理鹽水搗碎 。3000 轉離心10 分鍾取上清 。
5. 保存 :如果樣本收集後不及時檢測 ,請按一次用量分裝 ,凍存於-20℃ ,避免反複凍融 ,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍 。

使用方法:
一 、樣品 DNA 的製備
用自選方法提取 Cps DNA 。注意 :DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素 。如果不能很好純化樣品 DNA ,後麵的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度 。
二 、製備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例 。由於標準品濃度非常高 ,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行 ,千萬不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分) 。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原 ,本產品不提供活體病毒做陽性對照 ,隻提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照 。
1. 標記 6 個離心管 ,分別為 6 ,5 ,4 ,3 ,2 和 1 號 。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭 ,下同) 。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩衝液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注 :請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL ,建議每次稀釋 10 倍 ,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL) 。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得) ,充分震蕩 1 分鍾 ,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照 。
5. 換槍頭 ,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中 ,充分震蕩 1 分鍾 ,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照 。
6. 換槍頭 ,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中 ,重複上麵的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照 。
7. NC 管中不加任何陽性對照 。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步) ,每個樣品做 3 次重複 。PCR 後得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值 ,並以之為縱軸 ,以濃度的對數值為橫軸 ,繪製標準曲線 。 
檢測步驟 :
一 、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX) 、酶混合物(Enzymes MIX) ,冰上融化並振蕩混勻後 ,10000rpm離心10s 。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照) ,每個測試反應體係配製如下表 :
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量 ,加入一適當體積潔淨離心管中 ,充分混勻 ,10000rpm離心10s ,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液 ,向每管中加入處理後樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL ,10000rpm瞬時離心10秒 。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內 。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號 。報告基團 :設置為FAM 。淬滅基團 :NONE ,請勿選擇ROX參比熒光 。

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