老哥俱乐部

参数规格：

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集
、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后
，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝
。3000 转离心30 分钟取上清
。
3. 细胞上清液
：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物
。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清

。
5. 保存
：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻
。
​
使用方法:
一
、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA
。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素
。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度
。
二
、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）
。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的

、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照
。
1. 标记 6 个离心管

，分别为 6，5
，4，3，2 和 1 号
。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注

：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL

，建议每次稀释 10 倍
，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照
。
5. 换枪头
，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头
，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中

，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴
，绘制标准曲线。 
检测步骤：
一
、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)
、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s
。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)
，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量
，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团
：设置为FAM
。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

4-氟-2,6-二羟硝：4- two hydroxy nitrobenzene -2,6-：87987

3--2--4(3H)喹唑
：237.263- amino -2- phenyl -4 (3H)
：1904-60-5 C14H11N3O

3-(4-溴)吡唑
：3- (4-)
：73387-46-9 C9H7BrN2

丁二Succinate：118.09 C4H6O4

：110-15-6

丙：120.19Cumene：103-65-1

3-乙酰-2-溴吡：200.033- acetyl -2-
：84199-61-1 C7H6BrNO

丹参酮IIA磺钠Sodium sulfonate IIA
：
：

亮甲酚蓝Brilliant cresyl blue
：332.83 C17H21ClN4O：10127-36-3

三七皂甙R1Three seven saponin R1：933.131C47H80O18
：80418-24-2

番鸭细小病毒LAMP试剂盒人 CLEC3B / Tetranectin ELISA配对抗体

人 IL18 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签

小鼠LCN2 / NGAL 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

人 MMP-2 转录变体1 基因全长ORF克隆

重组甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 神经氨酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)

小鼠 PGRL / IGSF8 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 Syndecan-4 / SDC4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 CD8B / P37 / LEU2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 EIF4EBP1 基因全长ORF克隆

人 PAPPA2 / Pappalysin 2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 KPNA1 基因全长ORF克隆

人 IFNL3 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签