老哥俱乐部

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集
、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后
，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆
：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃
，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻

。

参数规格
：

​
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意
：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行
，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原
，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的
、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管
，分别为 6

，5，4
，3
，2 和 1 号
。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注

：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL
，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟

，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头

，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中
，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照
。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴
，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线
。 
检测步骤

：
一
、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)
，冰上融化并振荡混匀后

，10000rpm离心10s
。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀
，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内
。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团
：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

4-丁氧邻二甲腈：200.244- butoxy phthalate two chlorobenzonitrile
：81560-32-9 C12H12N2O

并恶唑
：119.12Benzoxazole：273-53-0 C7H5NO

5-尿嘧
：237.985- iodouracil：696-07-1 C4H3IN2O2

碱性橙22Basic orange 22
：426.98 C28H27ClN2
：4657-00-5

氯钾
：74.55Potassium chloride
：7447-40-7 KCL

邻二甲酸氢钾
：204.22O two formic acid

：877-24-7 C8H5KO4； HOOCC6H4COOK

2,6-二氟硝：159.092,6- two
：19064-24-5 C6H3F2NO2

硝酸铝：213Aluminium nitrate
：13473-90-0 AlN3O9

1-*-4-三丁锡咪唑
：599.4461- three phenyl methyl -4- three
：208934-35-4 C34H44N2Sn

鼠痘病毒LAMP试剂盒人 IL36RN / IL1F5 转录变体1 基因全长ORF克隆

小鼠 FCER1G 基因全长ORF克隆

人 PMVK 基因全长ORF克隆

人 GOT1 基因全长ORF克隆

甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) HA 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

重组小鼠 SRC Kinase / Proto-oncogene c-Src 蛋白 (His & GST 标签)

人 RPS6KA2 / RSK3 基因全长ORF克隆

人 BMP-2 ELISA配对抗体

人 glypican 4 基因全长ORF克隆

小鼠 CD209B 基因全长ORF克隆

人 PCYOX1 基因全长ORF克隆

人 PM20D1 基因全长ORF克隆