老哥俱乐部

参数规格：

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清
：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激
，收集血液后
，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离
。
2. 血浆
：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝
。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液

：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆
：将组织加入适量生理盐水捣碎
。3000 转离心10 分钟取上清
。
5. 保存
：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
​
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA
。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素
。如果不能很好纯化样品 DNA
，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例
。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行
，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照
，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5
，4

，3，2 和 1 号
。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头
，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注
：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍
，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头
，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照
。
7. NC 管中不加任何阳性对照
。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步）
，每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值

，并以之为纵轴
，以浓度的对数值为横轴
，绘制标准曲线。 
检测步骤：
一
、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)
，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s
。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)
，每个测试反应体系配制如下表
：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量
，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀
，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液
，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL
，10000rpm瞬时离心10秒
。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号
。报告基团
：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光
。

8-甲喹啉

：143.198- methyl group
：611-32-5 C10H9N

4,4'-二-2,2'-联吡：186.224,4'- two amino -2,2'-

：18511-69-8 C10H10N4

2-乙氧-3-吡

：249.052- -3- and：766557-60-2 C7H8INO

2--4-甲嘧：109.132- amino -4-：108-52-1 C5H7N3

7-氟-6-硝-4-羟喹唑啉
：209.137- -6- nitro -4- nitro group：162012-69-3 C8H4FN3O3

偶氮胭脂红GAzo rouge red G
：579.58 C28H18N3NaO6S2
：25641-18-3

5-溴喹啉：208.065- bromide：4964-71-0 C9H6BrN

亚铁钾：422.39Potassium ferrocyanide：14459-95-1 K4FeC6N6·3H2O

硫酸钾：97.18Potassium thiocyanate：333-20-0 KSCN

支原体通用LAMP试剂盒人 IL10RB / CRFB4 ELISA配对抗体

甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全长ORF克隆 (密码子优化)(表达载体)

人 PLVAP 基因全长ORF克隆

人 YARS 基因全长ORF克隆

人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

大鼠 AIFM2 基因全长ORF克隆

食蟹猴 CDH17 基因全长ORF克隆

人 Integrin alpha5 / CD49e 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签

人 SEMA6A 基因全长ORF克隆

小鼠 RIPK1 基因全长ORF克隆

人 PFKFB3 基因全长ORF克隆

人 ASB1 基因全长ORF克隆