老哥俱乐部

培养操作步骤 
：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）

； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测
。 

下列是产品的订购信息
：

细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控
、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态
、结构
、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH

、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制
，同时
，可以施加化学

、物理
、生物等因素作为条件而进行实验观察

，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时
，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术
：如倒置生物显微镜
、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
​
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养
，悬浮细胞可使用滴片法

； 
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄
，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞
，可以使用较大的培养皿，但不宜过大
，以避免培养液的浪费和增加污染机率
； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶）

，使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落
，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基
；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中

。
2
、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3
、细胞冻存
：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化
；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清
，加1ml冻存液重悬细胞
；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存
。

1-Deoxynojirimycin 脱氧野尻霉素 19130-96-2  5mg

Arecoline hydrobromide 氢槟榔碱 300-08-3  50mg

Rhyncholphylline 钩藤碱 76-66-4  20mg

DTT 二硫苏糖醇 1g  瓶

Kaempferitrin 苷 482-38-2  20mg

鱼脾脏淋巴细胞分离液试剂盒 200ml/KIT  盒

6,7-Dihydroxycoumarin 秦皮乙素 305-01-1  20mg

Sucrose 蔗糖 　　　　 250g  瓶

Neomangiferin 新芒果苷 64809-67-2  20mg

1.8ml冻存管 500个  包

Ginkgolide A 银杏内酯A 15291-75-5  20mg

ANNEXIN V-FITC-PI 凋亡检测试剂盒 50T  盒

JB6-C30细胞，小鼠皮肤细胞规格DR3 死亡受体（抗原）DR3/TRAMP (death receptor-3) 0.5mg

人瘤病毒16型E7蛋白抗原E7 protein/HPV 16 (Human papillomavirus type 16) 0.5mg

表皮生长因子受体（抗原）EGF-R (Epidemal growth factor receptor) 0.5mg

天冬氨酸蛋白酶家族蛋白(水稻蛋白的一种)（抗原）Eukaryotic aspartyl protease(Rice) 0.5mg

一种新型的胰岛细胞因子(抗原)FAM3B/PANDER(PANcreatic DERived factor) 0.5mg

食道癌相关基因（抗原）ECG2 (sophagus cancer-related gene-2) 0.5mg

脂肪酸结合蛋白2(抗原)Fabp2 (fatty acid binding protein 2, intestinal) 0.5mg

纤维连结蛋白(多肽抗原)Fibronectin (FN) 0.5mg

成纤维细胞生长因子-7/纤维母细胞生长因子 (抗原)FGF-7/KGF (Keratinocyte growth factor precursor) 0.5mg

成纤维细胞生长因子受体2抗原FGFR2(Fibroblast Growth Factor Receptor 2) 0.5mg

成纤维细胞生长因子-8/纤维母细胞生长因子-8 (抗原)FGF-8/HBGF-8 (Fibroblast growth factor 8) 0.5mg