產品名稱 :白堊立克次氏體LAMP試劑盒
產品特點 :白堊立克次氏體LAMP試劑盒上海老哥俱樂部生物相關產品 :四氟硼酸鐵 :272.84Iron tetrafluoroborate:1282-37-7 C10H10BF4Fe 10*4-正丙聯 :196.294- positive group :10289-45-9 C15H16月桂酸鉀 :238.41Potassium potassium :10124-65-9 C12H23KO2
產品型號 :50次
更新日期 :2021-02-26
訪問次數 :356
50次白堊立克次氏體LAMP試劑盒的詳細資料 :
使用方法:
一
、樣品 DNA 的製備
用自選方法提取 Cps DNA
。注意
:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素
。如果不能很好純化樣品 DNA
,後麵的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度
。
二
、製備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例
。由於標準品濃度非常高
,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行
,千萬不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分)
。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原
,本產品不提供活體病毒做陽性對照
,隻提供沒有傳染性的
、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照
。
1. 標記 6 個離心管
,分別為 6
,5
,4
,3
,2 和 1 號
。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭
,下同)
。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩衝液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注
:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL
,建議每次稀釋 10 倍
,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)
。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照
。
5. 換槍頭
,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中
,充分震蕩 1 分鍾
,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照
。
6. 換槍頭
,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中
,重複上麵的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照
。
7. NC 管中不加任何陽性對照
。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步)
,每個樣品做 3 次重複
。PCR 後得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值
,並以之為縱軸
,以濃度的對數值為橫軸
,繪製標準曲線
。
參數規格 :
產品名稱 | 白堊立克次氏體LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Rickettsia Cretaceous |
規格 | 50次 |
儲存條件
:
僅用於科研14℃或-20℃樣品收集
、處理及保存方法
1. 血清
:使用不含熱原和內毒素的試管
,操作過程中避免任何細胞刺激
,收集血液後
,3000 轉離心10 分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離
。
2. 血漿
:EDTA
、檸檬酸鹽或肝素抗凝
。3000 轉離心30 分鍾取上清
。
3. 細胞上清液
:3000 轉離心10 分鍾去除顆粒和聚合物
。
4. 組織勻漿
:將組織加入適量生理鹽水搗碎
。3000 轉離心10 分鍾取上清
。
5. 保存
:如果樣本收集後不及時檢測
,請按一次用量分裝
,凍存於-20℃
,避免反複凍融
,在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。
檢測步驟
:
一
、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)
、酶混合物(Enzymes MIX)
,冰上融化並振蕩混勻後
,10000rpm離心10s
。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)
,每個測試反應體係配製如下表
:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量
,加入一適當體積潔淨離心管中
,充分混勻
,10000rpm離心10s
,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液
,向每管中加入處理後樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL
,10000rpm瞬時離心10秒
。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內
。
循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號
。報告基團
:設置為FAM
。淬滅基團
:NONE
,請勿選擇ROX參比熒光
。
鄰三氟甲酰 :208.56The three adjacent fluorine methyl benzoyl chloride :312-94-7 C8H4ClF3O
2--5-溴-3-硝三氟甲 :2- amino -5- -3- nitro three f :157026-18-1
焦硫酸鉀 :254.32Potassium potassium sulfate :7790-62-7 K2S2O7
(S)-(4-異丙惡唑啉-2-)二茂鐵 :297.18(S) - (4- isopropyl oxazoline -2- Er Maotie) :162157-03-1 C16H19FeNO
四氟硼酸鐵 :272.84Iron tetrafluoroborate :1282-37-7 C10H10BF4Fe 10*
4-正丙聯 :196.294- positive group :10289-45-9 C15H16
月桂酸鉀 :238.41Potassium potassium :10124-65-9 C12H23KO2
2,2'-二-4-勒皮 :284.362,2'- two -4- lepidine :7654-51-5 C20H16N2
鹽鹽Gabapentin hydrochloride :207.7 C9H18ClNO2 :60142-96-3
白堊立克次氏體LAMP試劑盒人 S100A9 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
人 DUSP3 / VHR 杆狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 CD95 / Fas 轉錄變體1 基因全長ORF克隆
大鼠 CLPS 基因全長ORF克隆
人 AMDHD1 基因全長ORF克隆
人 GPHA2 基因全長ORF克隆
小鼠 Galectin-2 基因全長ORF克隆
重組小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 標簽)
人 HNRNPK 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽
人 RPA4 基因全長ORF克隆
小鼠 MCM7 基因全長ORF克隆
人 HSPB8 / Cryac 基因全長ORF克隆
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